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氨基末端分析
鎖定
氨基末端分析是組成蛋白質基本結構的多肽鏈兩端,原則上是一端有一個氨基末端殘基,另一端帶有一個羧基末端殘基。
- 中文名
- 氨基末端分析
- 外文名
- amino-terminal analysis
- 分 類
- 氨基末端殘基、羧基末端殘基
氨基末端分析基本結構
氨基末端分析 amino-terminal analysis
前者是將α氨基保持遊離狀態的氨基酸殘基,後者是將α羧基保持遊離狀態的氨基酸殘基。採用1-氟-2,4-二硝基苯的桑格(F.Sanger)的DNP法(DNP method),在歷史上是很著名的。該法可作為鑑定或定量分析位於氨基末端的氨基酸殘基的方法。也廣泛採用將DNP法超微量化的dansyl法(用5-二甲氨基萘磺酰氯)。Edman降解法是從氨基末端開始測定氨基酸排列順序的有效分析法。還可採用氨肽酶降解進行氨基末端分析。
氨基末端分析降解方法
真核細胞內80%可溶蛋白由於翻譯後修飾的結果,其N末端NH2基都被封閉,因而難以進行Edman降解;另外,微量蛋白的分離過程也可能導致氨基酸末端的人為封閉。因此,氨基酸序列的分析,只有在去除這些基團之後,或將該蛋白從內部切斷,然後對從產生的混合物分離得到的各個肽段進行測序才能得到。除此之外,對降解蛋白各個肽段的測序結果,能對該蛋白有更精確的鑑定。從而為隨後的分子克隆方案提供更多可能的選擇,而且,某些蛋白序列數據,對於説明DNA順序數據,確定蛋白質的修飾位點(酰化、甲基化、糖基化、磷酰化以及信號肽或前序列的切割位點等),以及對於蛋白質晶體結構的解釋是很必要的。一般可以通過以下的方法分離製備蛋白質並得到蛋白質序列的信息:①化學降解或酶降解後純化蛋白;②從混合物中分離所產生的內部切割的肽段;③分析鑑定所得到各個肽段。
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