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正負選擇
鎖定
為了克服這種困難,已經發展出了一種用於富集基因打靶事件或説是同源重組事件的特殊的試驗體系,它涉及到正選擇和負選擇兩個重要內容,所以特稱為正負選擇(positive-negative selection)法。為此需在基因打靶載體中克隆上兩個選擇標記基因。其中r-neo基因叫做正選擇標記基因,它編碼的新黴素磷酸轉移酸可抑制抗菌素G418的活性。因此,獲得了r-neo基因的轉化細胞,能夠在含有G418抗菌素的選擇培養基中生長、存活。HSV-tk基因叫做負選擇標記基因,它編碼的單純瘧疾病毒胸苷激酶,可以把9-{1,3-二羥-2-丙氧甲基}鳥嘌呤(ganciclovir,一種核苷的類似物),轉變成為毒性的核苷酸(三磷酸形式,正常小鼠中表現為單核苷酸類似物),造成細胞中毒死亡。因此,選擇培養基中的GCV能夠特異性地殺死表達HSV-tk基因的轉化細胞。
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