哺乳動物細胞

哺乳動物是全身被毛,運動快速,恆温,胎生和哺乳的脊椎動物.它是脊椎動物中軀體結構,功能和行為最複雜的一個高等動物類羣.鳥類和哺乳類都是從爬行動物起源的,它們分別以不同的方式適應陸棲生活所遇到的許多基本矛盾(陸地上快速運動,防止體內水分蒸發,完善的神經系統和繁殖方式),並在新陳代謝水平全面提高的基礎上獲得了恆温.因而鳥類與哺乳類又稱為恆温動物.

細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，乾燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養於一室，而洗刷消毒在另一室。

（1）超淨工作台：也稱淨化工作台，分為側流式、直流式和外流式三大類。

（2）無菌操作間：一般由更衣間、緩衝間和操作間三部分組成。操作間放置淨化工作台及二氧化碳培養箱、離心機、倒置顯微鏡等。緩衝間可放置電冰箱、冷藏器及消毒好的無菌物品等。

（3）操作間：普通培養箱、離心機、水浴鍋、定時鐘、普通天平及日常分析處理物

（4）洗刷消毒間：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。

（5）分析間：顯微鏡、計算機及打印機等。

常用細胞培養器皿有培養瓶、培養板、培養皿等。常準備量是使用量的三倍。器

皿應選擇透明度好、無毒、利於細胞粘附和生長的材料，常用一次性聚苯乙烯材料製品

或中性硬度玻璃製品。常用的器皿有下面幾種。

（1）液體儲存瓶：用於儲存各種配製好的培養液、血清等液體，常用規格有500ml、250ml、

100ml等幾種。

（2）培養瓶：根據培養細胞種類要求不同培養瓶的形態各異，用於細胞傳代培養的細胞要求瓶壁厚簿均勻，便於細胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小於1cm，允許吸管伸入瓶內任何部位，規格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等幾種。

（3）培養皿：用於開放式培養及其它用途。分直徑30mm、60mm、120mm等幾種。

（4）吸管：常用的有長吸管和短吸管兩類，長吸管也稱刻度吸管。其改良後管上部有球型刻度稱改良吸管，刻度吸管用於移動液體。常用1ml和10ml兩種。短吸管也叫滴管，分彎頭和直頭兩種。

（5）離心管：離心管是細胞培養中使用最廣泛的器皿，根據用途不同形態各樣，常用於細胞培養的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類。前者分別為50ml、30ml、15ml；後者則多為10ml和5ml。

（6）其它：如三角燒瓶、燒杯、量筒、漏斗、注射器等。

維持培養細胞旺盛生長，必須有恆定而適宜的温度；不同種類的細胞對培養温度要求也不同。人體細胞培養的標準温度為36.5℃±0.5℃，偏離這一温度範圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低温的耐受力較對高温強，温度上升不超過39℃時，細胞代謝與温度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數有可能恢復；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能；當温度在43℃以上

1小時，細胞全部死亡。相反，温度不低於0℃時，對細胞代謝雖有影響，但並無傷害作用；把細胞放入25－35℃時，細胞仍能生存和生長，但速度減慢；放在4℃數小時後，再回到37℃培養，細胞仍能繼續生長。細胞代謝隨温度降低而減慢。當温度降至冰點以下時，細胞可因胞質結冰受損而死亡。但是，如果向培養液中加入一定量的冷凍保護劑（二甲亞碸或甘油），可在深低温下如－80℃或－196℃（液氮）長期保存。