基因操作技術

《基因操作技術》以構建重組基因工程菌為主線，包括核酸的提取與檢測，靶基因的擴增，質粒的提取與檢測，核酸的酶切、分離純化與重組，重組質粒的轉化和陽性克隆的篩選，工程菌的誘導表達與蛋白質產物的檢測等內容。每個工作任務由任務原理、準備材料、操作步驟、注意事項和相關知識組成。

《基因操作技術》配有二維碼，方便學生自主學習。微課、視頻和電子課件等資源可在智慧樹在線平台和中國農業大學出版社網站http：//xy.caupress.cn/下載參考。

《基因操作技術》適用於高等職業院校藥品生物技術、生物製藥技術等相關專業教學使用，也可以供從事基因工程教學和生產的工作人員參考。

緒論

一、基因操作技術概述

（一）基因操作的發展簡史

（二）基因操作的四大要素

（三）基因工程製藥的技術路線

二、基因操作的工具酶

（一）限制性內切核酸酶

（二）DNA連接酶

（三）DNA聚合酶

（四）RNA聚合酶

（五）DNA修飾酶

（六）細胞裂解酶

三、基因工程製藥

（一）基因工程製藥的發展

（二）基因工程藥物的研發過程

（三）常用的基因工程藥物

項目一 獲得靶基因

任務一 提取基因組DNA

一、核酸的基礎知識

二、基因組DNA的提取

三、構建基因文庫

四、化學法合成DNA

任務二 擴增靶基因

一、PCR法克隆基因

二、從基因文庫中篩選靶基因

任務三 檢測靶基因

一、電泳法檢測核酸

二、紫外分光光度法測定核酸

三、熒光定量PCR測定核酸

四、核酸樣品的序列分析

任務四 純化靶基因

一、純化DNA的方法

二、純化DNA的質量要求

三、純化DNA常見問題

項目二 製備載體

任務一 提取質粒載體

一、質粒載體

二、噬菌體載體

三、酵母2 μm質粒

四、動物基因克隆載體

五、植物基因克隆載體

六、人工染色體載體

任務二 酶切與純化質粒載體

一、酶切的識別序列與切割位點

二、酶切後的末端

三、酶切方法

四、限制性內切核酸酶的影響因素

項目三 基因重組與轉化篩選

任務一 製備感受態細胞

一、原核宿主細胞

二、酵母宿主細胞

三、哺乳動物宿主細胞

四、昆蟲宿主細胞

任務二 DNA片段的連接

一、DNA連接酶的種類

二、DNA片段的連接方法

任務三 重組質粒的轉化

一、原核宿主細胞重組基因的導入

二、植物宿主細胞重組基因的導入

三、動物宿主細胞重組基因的導入

任務四 篩選目的重組子

一、遺傳表型直接篩選

二、依賴重組子結構特徵分析篩選

三、核酸分子雜交分析

四、免疫化學分析檢測

五、PCR篩選法

項目四 靶基因的誘導表達與產物檢測

任務一 靶基因的誘導表達

一、外源基因的表達過程

二、外源基因表達的調控

三、外源基因的表達系統

任務二 檢測靶基因表達產物

一、外源靶基因表達產物的檢測

二、外源靶基因表達產物的分離純化

附錄一 常用試劑及溶液配製

附錄1-1 試劑

附錄1-2 溶液的配製

附錄二 常用儀器的使用方法

附錄2-1 微量移液器的使用

附錄2-2 PCR儀的使用

附錄2-3 漩渦混合儀的使用

附錄2-4 電泳儀的使用

附錄2-5 凝膠成像儀的使用

參考文獻