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同聚物加尾

鎖定
所謂同聚物加尾法就是利用末端轉移酶在載體及外源雙鏈DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸,製成人工黏性末端,外源DNA和載體DNA分子要分別加上不同的寡聚核苷酸,如dA(dG)和dT(dC),然後在DNA連接酶的作用下連接成為重組的DNA。
中文名稱
同聚物加尾
英文名稱
homopolymeric tailing
定  義
在核酸分子末端加上一段同聚體多核苷酸。如在重組DNA操作中,利用脱氧核苷酸末端轉移酶向DNA 3′端逐個添加胸苷酸;在兩種DNA雙鏈3′端分別加上多胞苷酸或多鳥苷酸,以便通過它們之間的互補性進行連接等。
應用學科
生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
中文名
同聚物加尾法
優    點
2個
缺    點
2個
利用媒介
末端轉移酶的功能
轉移物
核苷酸
轉移標物
雙鏈DNA分子的突出或隱蔽的3'-OH

同聚物加尾方法核心

這種方法的核心是利用末端轉移酶的功能,將核苷酸轉移到雙鏈DNA分子的突出或隱蔽的3'-OH上。以Mg作為輔助因子,該酶可以在突出的3'-OH端逐個添加單核苷酸,如果用Co作輔助因子則可在隱蔽的或平末端的3'-OH端逐個添加單個核苷酸。

同聚物加尾方法優勢

同聚物加尾法優點: 1)首先不易自身環化. 2)因為載體和外源片段的末端是互補的黏性末端,所以連接效率較高.3)用任何一種方法制備的DNA都可以用這種方法進行連接.缺點:(1)方法繁瑣;(2)外源片段難以回收。由於添加了許多同聚物的尾巴,可能會影響外源基因的表達.重組連接後往往會產生某種限制性內切核酸酶的切點.
同聚物加尾 同聚物加尾
用5’ 末端處理DNA片斷