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原生質體培養
鎖定
原生質體培養:對離體植物的原生質體進行培養,形成完整植株的培養技術。
- 中文名
- 原生質體培養
- 外文名
- Protoplast culture
- 詞 義
- 對離體植物的原生質體進行培養
- 主要來源
- 植物的葉片,根尖,花粉,細胞等
- 原生質體純化
- 沉降法、漂浮法、界面法
原生質體培養原生質體
原生質體培養定義
是指用特殊方法脱去了植物細胞壁的、裸露的、 有生活力的原生質團。沒有細胞壁,但具有活細胞的一切特徵。
原生質體培養特徵
②具有全能性,並能進行人工培養髮育成完整植株。
③原生質體適合進行誘導融合形成雜種細胞。
原生質體培養來源
主要來源:植物的葉片,根尖,花粉,愈傷組織細胞等。
原生質體培養分離
酶解分離法
[2]
:用酶(瓊脂酶,果膠酶,纖維素酶等)將細胞壁分解。(條件温和,原生質體完整性好,活力高,得率高) 因此原生質體制備多采用酶解法,此法操作過程分為:取材消毒,酶解制備, 原生質體收集。
原生質體培養原生質體純化
原生質體的純化方法:沉降法、漂浮法、界面法。
原生質體培養測定
原生質體培養鑑定
即檢驗所獲得的原生質體是否是真正的原生質體
(1)低滲脹破法:把原生質體放入低滲透溶液中,在顯微鏡下觀察原生質體從低滲溶液中吸水脹破的過程。如果是真正的原生質體,因為沒有細胞壁,這樣在脹破後留下的殘跡應該是無形的。如果原生質體還帶有部分細胞壁,則原生質體從無壁部分吸水向外膨脹直至脹破,破碎後留下的殘跡仍保持半圓形的細胞壁。
(2)熒光染色法:將原生質體放入離心管中,加入0.7mol/L甘露醇配置的 0.05%~0.1%熒光增白劑溶液,染色5~10min,離心、洗滌除去多餘的染料,在熒光顯微鏡下觀察。綠色光顯示纖維素的存在,發出紅色光的是沒有纖維素的真正的原生質體
原生質體培養活力測定
檢驗原生質體是活細胞還是死細胞
①二乙酸熒光素(FDA)法:FDA本來沒有熒光,當其進入細胞後被脂酶分解為具有熒光的極性物,不能透過質膜,而是留在細胞內發出熒光。因此能發出熒光的是具有活性的原生質體。
②酚藏花紅染料法:具有活性的原生質體均不着色,而死去的原生質體立即染成紅色。
③伊文思藍染色法:有活力的細胞不能吸收染料為無色;而沒活力的細胞則能吸收染料顯藍色。
其他法:①胞質環流法②滲透壓變化③氧電極法④形態觀察法
原生質體培養培養簡介
原生質體培養植株再生
經原生質體培養的植株再生一般經過細胞壁再生,細胞分裂成細胞團、愈傷組織(或胚狀體)、植株再生這幾個過程。
①細胞壁再生:原生質體在合適條件下短時間內開始膨脹,葉綠體重排,並開始合成新的細胞壁,進而由球形變成橢圓形。
②細胞分裂:不同的植物細胞分裂時間不同。為了細胞能持續分裂,應注意及時添加新鮮培養液。
④植株再生,誘發芽和根的生成。 誘導胚狀體:在原生質體培養時直接誘發胚狀體的生長,從而發育成完整植株。
原生質體培養培養的意義
①植物原生質體是細胞無性系變異和突變體篩選的重要來源;
②植物原生質體是細胞融合工作的基礎;
③植物原生質體是植物遺傳工程的理想受體和遺傳飾變的理想材料;
④在細胞生物學與遺傳理論研究上的應用。
- 參考資料
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- 1. 鞏振輝,申書興.植物組織培養.北京:化學工業出版社,2013年:99-108
- 2. 安利國.細胞工程.北京:科學出版社,2009年:217-223
- 3. 二倍體馬鈴薯葉肉細胞原生質體培養的研究 .中國知網[引用日期2015-05-29]
- 4. 袁華玲; 金黎平; 黃三文; 李穎; 屈冬玉;.二倍體馬鈴薯葉肉細胞原生質體培養的研究.安徽合肥:生物學雜誌,2014年
- 5. 原生質體融合 .CNKI學問[引用日期2014-06-07]