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切口平移
鎖定
切口平移(nick translation)是切口產生3‘羥基和5’磷酸基團,DNA延伸合成3‘端,5’端被小片段降解,缺口位點沿着雙鏈向3‘端移動,是在體外向DNA分子引入放射性標記核苷酸的技術。
- 中文名
- 切口平移
- 外文名
- nick translation
- 定 義
- 切口產生3‘羥基和5’磷酸基團,DNA延伸合成3‘端,5’端被小片段降解,缺口位點沿着雙鏈向3‘端移動,是在體外向DNA分子引入放射性標記核苷酸的技術
切口平移簡介
切口平移法的缺點:1.放射物質攝入率較低;2.長時間反應後在DNA Pol I的外切酶活性的作用下,將已經摻入的放射性物質遊離下來,降低了攝入率;3.必須有高純度的模板DNA;4.反應後必須除去未反應的放射性dNTP。
切口平移操作步驟
1、用DNase I處理雙鏈DNA,使之隨機產生單鏈斷裂。
2、DNA聚合酶I的5‘-3’外切酶活性從斷裂處5‘除去一個核苷酸,同時5‘-3'聚合酶活性將一個放射性核素標記的單核苷酸引入到斷裂的3'端。
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