凝固蛋白原

凝固蛋白原第一類方法是一種功能測定法，所形成的纖維蛋白，又可再分為測重法，酚試劑比色法和紫外光度法、測氮法、濁度法和凝血酶凝固時間法等。這類方法的優點是測定的是有凝血功能的纖維蛋白原，又稱為可凝固蛋白（clottableprotein），故特異性較好。方法可簡可繁，常規使用中，多采用較簡便的VonClauss法。根據這種方法設計的商品藥盒（kit），已在一些國家廣泛使用。據1975年美國CAP的調查，1939個臨牀化驗室中，用此法者佔1824家，即94%用了本法，其中Tan等採用了速率法。這類方法中由Ratnoff和Menzzie改良的酚試劑比色法，其曾被提出作為參考方法。近幾年來，不少文獻推薦用Jocobsson的改良法作為纖維蛋白原標準的定值方法。這類方法的缺點是，從理論上講，有兩方面可引起誤差。一是所析出並測定的是纖維蛋白而非纖維蛋白原。已知纖維蛋白原變成纖維蛋白時會從α和β肽鏈上分別切下兩個短肽，即A肽（FpA）和B肽(FpB)。這樣纖維蛋白實際上比纖維蛋白原的質量少了10%。二是已知纖維蛋白一旦形成，就會吸附一些凝血因子或纖溶因子，這樣又會增加所測纖維蛋白原的量。此外，本法在操作中在獲取纖維蛋白和洗滌（擠壓）除去其它蛋白成份時，不僅比較麻煩而且也難以完全徹底，會造成其它蛋白污染。

第二類方法（物理化學測定法）在我國應用最廣。這類方法又可分為鹽析法（包括用亞硫酸鈉、硫酸銨或氯化鈉鹽析，用蛋白質顯色或比濁法測定），熱變性沉澱法和電泳法等幾種。這類方法都比較簡單、快速，尤其適於急診檢驗，但缺點是本法的特異性不強。所測的不是有凝固功能的纖維蛋白原，可能包括部分的降解產物和/或其它蛋白。而電泳法又太繁瑣，不適於常規工作。

第三類方法（免疫學方法），是將純纖維蛋白原作為抗原免疫動物，製成多克隆或單克隆抗體。然後用免疫膠乳、被動血凝或反向血凝、單向免疫擴散、火箭電泳以及ELISA等方法測定。優點是大部分方法簡便，但缺點是所測的不僅是可凝固的纖維蛋白原，可能包括了它的降解產物（因為它們有共同抗原），也可能包括了障礙性纖維蛋白原（dysfibrinogens即N端穀氨酸γ位未羧化的無功能的纖維蛋白原,又稱缺維生素K引起的蛋白質，PIVKA）。但免疫法也有一個好處，就是可用來測定PIVKA。如果一個患者總纖維蛋白原（用免疫學測定結果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纖維蛋白原卻明顯減少，即可判斷為存在PIVKA。肝病、維生素K缺乏等均可導致PIVKA升高，有臨牀診斷價值。總的説來，免疫學方法用於臨牀常規實驗室仍存在一定問題。

國內引進很多自動血凝分析儀，這些儀器在測PT時往往同時報告纖維蛋白原。其原理和理論根據是：當PT測定完成時，全部纖維蛋白原均變成纖維蛋白（相當於Clauss法血漿中加入了凝血酶），其形成的濁度與纖維蛋白的含量成正比。因此，不需另加任何試劑，即可由濁度直接推算出纖維蛋白原的含量。故本法又稱為PT導出（或衍生）纖維蛋白原測定法，簡稱PT-Der法。關於本法的可靠性，國外不少研究者已作過比較，總的情況是：此法精密度相當高，當血漿纖維蛋白原含量在正常範圍時，PT-Der法與經典的Clauss法無顯著差異或略高於Clauss法；但當纖維蛋白原減低時，PT-Der法往往偏高（p＜0.001）,故此法用於纖維蛋白原含量減低者應慎重.國內目前採用此法者已逾來逾多。由於不斷有文獻報道，血漿纖維蛋白原水平的變化不僅與凝血障礙、出血、DIC、應激（因為它也是一種急性期蛋白）有關，而且與冠心病，心肌梗塞有關，因此臨牀上倍受重視。不僅工作量增大而且對方法準確性的要求也越來越高。但至今WHO、ICSH和NCCLS仍未明確提出一個纖維蛋白原的標準化或推薦方法，供臨牀常規使用。但作為方法標準化的第一步，纖維蛋白的標準已經有國際參考製品；另外用於標準品的標化也有一個推薦方法。以下重點介紹這兩個方面。