凍融法

酶的提取溶劑可以用水、一定濃度的乙醇、乙二醇、丁醇和稀鹽溶液、緩衝溶液等；也可以用稀鹼或稀酸溶液，如用稀硫酸提取胰蛋白酶，用稀鹽酸提取胃蛋白酶。溶劑用量一般為原料重量的1～5倍。攪拌可加速提取，但轉速不宜太快，否則會產生泡沫而難以過濾或使酶變性。多數酶的提取要在50C以下操作，但有的酶在較高温度下提取更好，如胃蛋白酶在45℃提得收率較高，一般可在一5～+40℃間適當選擇。提取液的pH應在酶的穩定pH範圍內，並應遠離其等電點的pH為宜，如蛋白酶選用pH 2．5～3，0，胰蛋白酶和α一糜蛋白酶則用0．25 N硫酸提取。若在中性或鹼性提取時，最常用的是0．15 mol/L氯化鈉、0.02～0．05mol/L磷酸緩衝液、0．02-0.05 mol/L焦磷酸緩衝液。正丁醇的親脂性強，能透入酶的脂質結合物中，又兼有親水性，有類似表面活性劑的作用，適用於提取“結酶”。

凍融法：將待破碎的細胞冷至－15℃到－20℃，然後放於室温(或40℃)迅速融化，如此反覆凍融多次，由於細胞內形成冰粒使剩餘胞液的鹽濃度增高而引起細胞溶脹破碎。