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T4 RNA連接酶
鎖定
T4 RNA Ligase,即T4 RNA連接酶,是一種ATP-依賴的可以催化單鏈RNA、單鏈DNA或單核苷酸分子間或分子內5'-P末端與3'-OH末端之間形成磷酸二酯鍵的酶。
- 中文名
- T4 RNA連接酶
- 外文名
- T4 RNA ligase
- 來 源
- 由大腸桿菌表達
- 純 度
- 不含DNA內切酶和外切酶
- 失活或抑制
- 70℃加熱10分鐘可失活
T4 RNA連接酶簡介
T4 RNA Ligase主要用於RNA和RNA之間的連接,連接時需要5'磷酸基團和3'羥基的存在。不僅可以進行RNA分子間的連接,也可以進行RNA分子(最短8個鹼基)的環化連接。
T4 RNA Ligase可以用於RNA和單核苷酸之間的連接,單核苷酸必須為5'和3'均磷酸化的形式,此時常用於RNA的3'末端標記。
T4 RNA Ligase也可以用於DNA和RNA之間的連接。當DNA提供5'磷酸基團,RNA提供3'羥基時,連接效率較高;當DNA提供3'羥基,RNA提供5'磷酸基團時,連接效率非常低。
T4 RNA Ligase也可以用於DNA和DNA之間的連接,但連接效率非常低。主要用於DNA的環化連接,例如5' RACE中的cDNA環化。DNA和DNA之間的連接儘管可以進行,但比較困難。
用途:用RNA 3'末端標記;RNA和RNA分子間連接;寡核苷酸的環化;tRNA修飾;5' RACE中寡核苷酸連接到cDNA單鏈;在蛋白質特定位點引入非天然氨基酸。
來源:由大腸桿菌表達,表達基因的來源為T4噬菌體。
活性定義:37℃30分鐘內,催化1 nmol 5'-[P]-(A)12-18成為磷酸酶不能消化的環形產物所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件:50mM Tris-HCl(pH7.5),10mM MgCl2,10mM DTT,1mM ATP,10μM 5'-[P]-(A)12-18(10μM in 5'-termini)。
純度:不含DNA內切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。
酶儲存溶液:10mM Tris-HCl(pH7.5),1mM DTT,50mM KCl,0.1mM EDTA,50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X):500mM HEPES-NaOH(pH8.0 at 25℃),100mM MgCl2,100mM DTT。
T4 RNA連接酶失活抑制
70℃加熱10分鐘可使T4 RNA Ligase失活。
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