SABC法

SABC法：一抗+ 生物素標記二抗+ 滴加試劑SABC（鏈黴卵白素+ 辣根酶標記生物素）+ 辣根酶底物顯色。目前常用的親和素從鏈黴菌(streptomyces)培養物中提取，因此稱為鏈黴親和素—生物素—過氧化物酶複合物技術(streptavidin biotin-peroxidase complex method，SABC法)。

生物素(biotin)為含硫的雜環單羧酸，分子量小，通過其羧基與蛋白質的氨基結合，從而可標記抗體和酶。親和素(avidin)又稱抗生物素蛋白，是一種糖蛋白，在雞蛋白中被發現，分子量為68 000。生物素與親和素有很高的親和力，1個親和素分子上有4個生物素結合位點。在ABC法中，不對特異性第一抗體進行標記，而用生物素標記第二抗體，染色前按一定比例將親和素與生物素標記的過氧化物酶混合，製成ABC合物，並使親和素分子上至少空出1個生物素結合位點。染色時，標本中的抗原先與第一抗體結合，後者再與生物素標記的第二抗體結合，然後加入ABC複合物，結合到第二抗體的生物素上，最終形成的複合物網絡了大量的酶分子。因此，敏感性更高。

（1）脱蠟、水化。

（2）PBS洗兩次各5分鐘。

（3）用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室温封閉5～10分鐘，蒸餾水洗3次。

（4）抗原修復。

（5）PBS洗5分鐘。

（6）滴加正常山羊血清封閉液，室温20分鐘。甩去多餘液體。

（7）滴加Ⅰ抗，室温1小時或者4℃過夜或者37℃1小時（4℃過夜後在37℃復温45分鐘）。

（8）PBS洗三次每次2分鐘。

（9）滴加生物素化二抗，20℃～37℃20分鐘。

（10）PBS洗3次每次2分鐘。

（11）滴加試劑SABC，20℃～37℃20分鐘。

（12）PBS洗4次每次5分鐘。

（13）DAB顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色（鏡下掌握顯色程度）。

（14）蒸餾水洗。蘇木素復染2分鐘、鹽酸酒精分化。

（15）脱水、透明、封片、鏡檢。