FPLC

FPLC是專門用來分離蛋白質、多肽及多核苷酸的系統，是FPLC近年來的一項重要革新，它不但保持了HPLC的快速、高分辨率等特性，而且還具有柱容量大、回收效率高及不易使生物大分子失活等特性。因此在近年來在分離蛋白質、多肽及寡核苷酸等方面得到了廣泛應用

隨着HPLC的發展，出現了兩種新型填料：薄殼型填料和雙擴散灌流型填料，它們對大分子物質的分離具有獨特的優越性，從而使FPLC的應用領域得以拓展。其可應用於蛋白、有機化合物的分離純化，能定量測定蛋白的含量和確定蛋白的分子量，因此可應用於生物學領域和化學領域的研究。

快速蛋白液相色譜(FPLC)、中壓液相色譜(MPLC)、低壓液相色譜(LPLC)是近年來從HPLC基礎上發展的新型色譜技術，其中FPLC能以極快的速度把複雜混合物分離，可在短時間內大量純化樣品，具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性，在生命科學研究及藥物生產上使用越來越廣泛。

(1)FPLC與HPLC相同的是：都採用輸液泵、高靈敏檢測器、梯度洗脱裝置、自動收集裝置和計算機控制等設備，均具有快速、分辨率高、分離效能高等特點。

(2)FPLC與HPLC不同的是：HPLC的管道系統多采用金屬材料，流動相由往復泵或隔膜泵驅動，使用高壓，色譜柱內徑小，分析精度高，最大流速通常不超過20 mL/min(有些製備級HPLC可達300 mL/min)，有時需使用一定濃度的有機溶劑，適用於微量樣本檢測或少量純化製備；FPLC的管道系統是由耐高壓的塑料管組成，流動相多由柱塞式泵驅動，中低壓，所用色譜柱內徑大，流速範圍0～100 mL/min(最大流速可達1 000 mL/min)，分析精度沒有HPLC高，只使用常規無機鹽溶液，適於大規模純化樣品。

(3)應用範圍：HPLC可分析低沸點低相對分子質量分子、高沸點中分子、高分子有機化合物(包括極性、非極性)、離子型無機化合物、熱不穩定生物分子；FPLC專門用於蛋白質、多肽及多核苷酸的分離純化 ^[1]  。

FPLC(fast protein liquid Chromatography)是一種特殊的高效液相層析(HPLC，high pressureliquid chromatography)裝置，主要用於蛋白質組分的快速分離純化和定量測定。其基本原理與HPLC相同，即在高壓條件下(20—200 kg/cm²)，利用分離物質在液相載體中的遷移速率的不同而進行分離純化。

採用HPLC分離純化生物大分子時，由於液相載體一般為有機溶劑，容易變性失活生物大分子，降低生物大分子的回收率。同時HPLC系統的流通線路採用非惰性的不鏽鋼製造，工作狀態下可能會使金屬離子發生解離，從而吸附某些蛋白質組分。而FPLC則以耐高壓的有機玻璃管作為層析柱，其它管道也用耐高壓的非金屬材料製成，同時採用惰性液相載體，可安全快速地分離蛋白組分。因此FPLC保留了HPLC的操作簡易、重複性強、分離速度快等特點，並且在生物大分子分離純化過程中具有更高的分辨率和實用性。FPLC有其專用預裝柱，並配備有分子篩、離子交換、疏水層析等各類層析柱，在生物學、化學和環境科學等領域有着廣泛的應用。

(一)器材

FPLC裝置(Water公司)進樣器。

(二)試劑

(1)洗脱緩衝液。

(2)20%乙醇。

(三)材料

若干待測蛋白質樣品。

1、檢查儀器連接情況，打開電源開關。

2、在控制枱上設計流速、紙速。

3、經加樣閥加樣：將閥杆放至Injection位置，用注射器加入樣品。再將閥杆扳至Load位置，樣品進入層析柱。

4、記錄進樣時間，然後依次用不同緩衝液洗脱。收集各管組分。

5、實驗完畢後，以20%乙醇沖洗管道，關閉電源，做好記錄 ^[2]  。