黃麴黴毒素M1

密度：1.66g/cm³

熔點：299℃

沸點：644.3℃

閃點：11℃

折射率：1.718

外觀：無色結晶性粉末，呈綠藍色熒光

溶解性：溶於甲醇、乙醇和氯仿 ^[2] 

摩爾折射率：77.57

摩爾體積（cm³/mol）：196.7

等張比容（90.2K）：589.9

表面張力（dyne/cm）：80.8

極化率（10^-24cm³）：30.75 ^[2] 

疏水參數計算參考值（XlogP）：0.5

氫鍵供體數量：1

氫鍵受體數量：7

可旋轉化學鍵數量：1

互變異構體數量：10

拓撲分子極性表面積：91.3

重原子數量：24

表面電荷：0

複雜度：695

同位素原子數量：0

確定原子立構中心數量：2

不確定原子立構中心數量：0

確定化學鍵立構中心數量：0

不確定化學鍵立構中心數量：0

共價鍵單元數量：1 ^[2] 

主要用於新陳代謝和致癌性的研究。

樣品經提取、濃縮、薄層分離後，AFM1在波長365nm的紫外光下產生藍紫色熒光，根據其在薄層板上顯示熒光的最低檢出量與標準溶液的熒光強度相比較來測定含量。

（1）AFM1標準溶液的配製

用三氯甲烷配製10μg/mL的AFM1標準溶液，用紫外分光光度計在357nm波長AFM1標準溶液的準確濃度（AFM1的摩爾消光係數為19950），避光4℃保存備用。

（2）樣品提取

液體樣品直接加入甲醇振盪過濾得提取液，固體樣品粉碎過篩或研磨混勻後，用一定比例的甲醇水溶液振盪過濾得提取液。提取液可以先用石油醚和氯化鈉溶液分配淨化，再用三氯甲烷轉相提取，氯化鈉溶液水洗 ，無水硫酸鈉脱水後，收集三氯甲烷層於65℃水浴通風揮幹，最後用三氯甲烷將蒸發皿中殘留物轉移至濃縮管中，減壓吹氣法將此液濃縮至一定體積後備用。

（3）點樣層析、展開、測定

各取10μL樣品用濃縮液和標準液分別點於己在105℃活化2h的硅膠G薄層板上，置於加入一定量的展開劑的展析缸中展開，橫展和縱展相結合，揮幹後在紫外燈下觀察並測量R_f值（一般AFM1的Rf值為0.34），並與標準溶液的最低檢出量（0.0004μg）的熒光強度相比較，同時用硫酸溶液（1:3）顯色劑噴熒光點，進行確證試驗，最後按樣品稱 量值、濃縮體積、總稀釋倍數、標準溶液最低檢出量進行計算。

用C18柱抽提純化樣品中的AFM1，乙醚對C18柱洗滌，再用CH₂Cl₂-乙醇洗脱AFM1，然後加入三氟乙酸（TFA）對AFM1進行衍生化處理，利用液相色譜熒光檢測器檢測，並與標準AFM1-TFA的衍生物比較，進行定性、定量分析。

（1）AFM1標準溶液的配製

先用乙腈配製2000μg/mL的AFM1標準溶液，再用苯-乙腈（9:1）溶液配製成0.5μg/mL的AFM1標準濃度工作液，可用紫外分光光度計校正濃度（AFM1在乙腈中的摩爾消光係數為19850）。

（2）色譜條件

色譜柱：含球形的5μm顆粒大小的C18鍵合硅膠柱，柱長 25cm，內徑0.4mm（如Spherisorb 5 ODS2）

檢測器：具有365nm激發波長，＞400nm的發射波長，對lng AFM1-TFA衍生物的靈敏度為50～100%滿刻度響應的熒光檢測器（如Spectroflow 980）

流動相：水：異丙醇：乙腈（80:12:8）

流速：1.0mL/min

進樣量：50～100μL

（3）樣品提取、純化

用C18 Sep-Pak試樣提取柱或0.8×4.0cm的硅膠60淨化柱淨化乳液樣品，乳液樣品需充分混勻使不均質的乳脂分佈均勻，加入同體積的熱水（約80℃）充分稀釋乳液。淨化柱相繼用乙醚；水-乙腈清洗，上樣後用CH₂Cl₂-乙醇進行AFM1的洗脱上樣和洗脱時流速不易過快，否則會得到偏低的回收率，然後將含AFM1的洗脱液真空低温（＜35℃）濃縮或氮氣流下室温吹乾，用CH₂Cl₂轉移殘留物至小瓶中，氮氣流下蒸氣浴揮幹，備用。

（3）衍生物的製備

將200μL己烷及200μL三氟乙酸（TFA）加入含有樣品殘留物的小瓶中，渦流混合器上振搖5～10sec，40℃水浴中加熱10min，通氮氣加熱揮發至幹，製成的衍生物加入2mL水-乙腈（75:25）充分振盪，供液相色譜分析。

標準AFM1的衍生物製備：加200μL己烷及50mL三氟乙酸（TFA）於小瓶混合，加入50μL AFM1標準工作溶液，振搖5～10sec，如前所述樣品的衍生物同樣處理。

（4）檢測

用峯高或峯面積作標準曲線，結果應保證線性關係，AFM1的保留時間為4～5min。根據峯高或峯面積、標準溶液濃度、進樣體積、樣品的總體積來計算出樣品中AFM1的濃度。該方法的靈敏度為0.01～0.5μg/L，回收率在80%～100%之間。

試樣經過離心、脱脂、過濾後，濾液經過鍵合有AFM1特異性單克隆抗體的免疫親和柱淨化，AFM1被柱吸附，先用某一溶劑洗滌雜質，再用洗脱液將AFM1洗下，得到較純的AFM1洗脱液，最後結合熒光光度計或高效液相色譜儀進行AFM1含量的測定。

（1）樣品預處理

液體牛乳及牛乳製品，取50mL樣品，加入1.0gNaCl，4000r/min離心10min，移取下層（上層脂肪層），用玻璃 纖維濾紙過濾備用。固體奶粉及製品，稱取5.0g樣品，用50mL130℃～ 60℃熱去離子水溶解混勻，以下同液體牛乳預處理方法。

（2）柱淨化

先將免疫親和柱與玻璃注射器連接好，準確加入10mL預處理的澄清濾液，接上空氣壓力泵，調節壓力使溶液以3～6mL/min的流速通過免疫親和柱，直至2～3mL空氣通過柱體，用10mL甲醇：水（1:9）清洗柱子2次，棄去全部流出液，然後準確加入1.0mL甲醇：水（8:2）洗脱已免疫結合於柱上的AFM1，流速調整為1～2mL/min，收集洗脱液於玻璃試管中，備進一步儀器檢測用

（1）光光度計法

首先在激發波長360nm，發射波長450nm波長下進行熒光光度計的校準，綠色標定管為0，紅色標定管 為2.0，黃色標定管為1.0±0.2，然後於50mL AFM1顯陰性的樣品中添加AFM1系列標準溶液（濃度分別為0、0.1、0.5、1.0μg/L）按上述分析步驟進行分離純化得到洗脱液，各加入1mL 0.002%溴溶液與AFM1產生衍生物，於熒光光度計中測定熒光強度，繪製AFM1標準濃度與熒光強度的標準曲線。最後樣品洗脱液加入溴溶液衍生後，測定熒光強度，通過標準曲線計算樣品中AFM1含量。

（2）高效液相色譜法

洗脱液取10～20μL於高效液相色譜儀進行熒光檢測，外標法定量。

該方法結合了抗原抗體的特異性免疫反應和酶的高效催化顯色反應。首先將抗AFM1抗體包被於固相的聚乙烯微孔上，加入作為抗原的AFM1標準品或含AFM1的樣品，同時加入AFM1酶結合物，與抗體進行免疫競爭反應，然後加入酶基質：顯色劑進行顯色，通過標準品孔、樣品孔的顏色深淺來確定樣品中AFM1的含量。

（1）樣品處理

牛奶樣品：將50ml含脂牛奶降温至10℃以下，3500r/min離心10min，用吸管吸棄上層脂肪層，取下層牛奶液 作為待測液。奶粉樣品：稱取5g奶粉於100ml三角瓶中，加入50ml蒸餾水振搖5～10min混勻，以下步驟同上述牛奶樣品處理方法。

（2）試劑準備

抗體：將小分子量的AFM1通過化學合成偶聯一高分子量的蛋白（BSA，OV，KLH等），製備完全抗原，然後免疫家兔2～3個月，期間加強免疫3～5次，最後從家兔血液中提取抗AFM1的免疫球蛋白（即多克隆抗體）。

酶標抗原：將AFM1通過化學合成，在“橋連劑”的作用下結合上酶蛋白（常用辣根過氧化物酶），經提純後冷凍乾燥得到AFM1酶結合物。

（3）檢測

將抗AFM1抗體包被於微孔板上，4 ℃過夜，封閉；每孔中加入AFM1標準溶液或樣品待測液，然後加入AFM1酶結合物，37℃反應30min；洗板後每孔中加入酶基質和顯色劑，37℃顯色15min；目視法或儀器法測定；通過繪製標準曲線計算樣品中AFM1的含量。 ^[1] 

上述四類檢測方法是目前國內外分析測定AFM1的最主要方法，主要特點見表

注：a：乳粉；b：牛乳

綜上所述：需提取淨化的分析方法樣品前處理操作煩瑣，複雜，費時，勞動強度大。TLC的特異性較差，靈敏度也相對較差，AFM1標準品濃度較高，潛在的污染性較高，HPLC所需儀器設備投資大，操作技術要求高，淨化柱消耗較多，檢測成本較高，免疫親和柱特異性較好，但需結合HPLC儀和熒光光度計才能定量檢測，檢測技術要求和成本較高，而ELISA法相比而言，操作簡便，快捷，污染較小，靈敏度也較高，適合批量樣品的普檢和篩選，特別是研製成功的試劑盒，給檢測人員帶來很大的方便，同時，也節省了成本，符合目前國際上檢測領域的發展方向。 ^[1] 

S22：Do not breathe dust.

不要吸入粉塵。

S36/37/39：Wear suitable protective clothing, gloves and eye/face protection.

穿戴適當的防護服、手套和眼睛/面保護。

S45：In case of accident or if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the lable where possible).

發生事故時或感覺不適時，立即求醫（可能時出示標籤）。

S53：Avoid exposure - obtain special instructions before use.

避免接觸，使用前獲得特別指示説明。

R11：Highly flammable.

高度易燃的。

R20/21/22：Harmful by inhalation, in contact with skin and if swallowed.

吸入、與皮膚接觸和吞食是有害的。

R26/27/28：Very toxic by inhalation, in contact with skin and if swallowed.

吸入、與皮膚接觸和吞食有極高毒性。

R39/23/24/25：Toxic : danger of very serious irreversible effects through inhalation, in contact with skin and if swallowed.

有毒的：經吸入、與皮膚接觸和吞食有極嚴重不可逆作用危險。

R40：Possible risks of irreversible effects.

可能有不可逆作用的風險。