預凍法

植物細胞的超低温保存技術主要包括幹凍法、預凍法、兩步法、玻璃化法和包埋脱水法等。兩步法、預凍法和幹凍法是植物種質超低温保存的傳統技術。80年代末至90年代初，玻璃化法和包埋脱水法開始應用於植物材料的超低温保存。

幹凍法

進行脱利用無菌空氣流，乾燥硅膠或飽和溶液表面的氣相等對樣品水處理，然後快速將樣品投入液氮貯存

預凍法

樣品在添加冰凍保護劑(如蔗糖、海藻糖、二甲亞碸、甘油和乙二醇等)後置於零下某個温度(一10～一70C，可通過置於家用冰箱、低温冰箱或液氮蒸汽相中實現)，若干小時或過夜後，將樣品投入液氮貯存。有些樣品用預凍法保存時，可不加冰凍保護劑。

兩步法

樣品在添加冰凍保護劑後，用可控速率的降温設備(程序降温儀)，以某個速率(每分鐘降0．1～5．0。C)將樣品降温至轉移温度(一般為一40～一70‘C)，然後投入液氮貯存。冰凍保護劑成分、降温速率和轉移温度等因素影響凍存效果。預凍法實際上是降温速率不嚴格控制的兩步法。

玻璃化法

樣品用高濃度的複合冰凍保護劑(玻璃化保護劑)處理後．快速投入液氮貯存。生物物理學上，含水溶液能固化分成兩種主要形式，一種是冰晶態，一種是玻璃化態。如果溶液非常粘稠，降温速度又非常快，冰晶難以生長或沒有充分時間生長，溶液就進入玻璃化態。進入玻璃化態時，水分子沒有發生重排，不產生結構和體積的變化，減輕了機械損傷和溶液效應損傷，改善了凍存效果。兩步法中的第一步是通過細胞外緩慢結冰引起胞外溶液濃縮，從而誘導胞內脱水；第二步是濃縮了的細胞質在快速投入液氮時進入胞內玻璃化態。而在玻璃化法超低温保存中，細胞直接用極高濃度的保護劑脱水，快速降温時胞內胞外都進入玻璃化態。

包埋脱水法

莖尖、分生組織和體細胞胚等樣品用褐藻酸鈣包埋後，第一階段先在含高濃度蔗糖的培養基中脱水，第二階段再用無菌空氣流或乾燥硅膠脱水，然後投入液氮貯存。如果第二階段用玻璃化保護劑脱水後投入液氮貯存，可稱包埋玻璃化法；如果第二階段在冰箱中脱水，可稱包埋預凍法；如果第二階段用程序降温儀脱水，可稱包埋兩步法。 ^[1]