靈芝多糖

靈芝多糖是由三股單糖鏈構成的、具有螺旋狀立體構形（三級結構）的葡聚糖，其立體構形與脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）相似，是一種大分子化合物，其分子量從數千到數十萬，它是一種從靈芝孢子粉或靈芝中提取的物質。不溶於高濃度的酒精，微溶於低濃度的酒精及冷水，在熱水中能全部溶解。靈芝多糖都存在於靈芝的細胞壁內壁。靈芝多糖中除含有葡萄糖外，大多還含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、巖藻糖、甘露糖、鼠李糖等單糖，但含量較少。單糖間糖苷鍵連接有1,3、1,4和1,6數種。大多為β型結構，少數為α-型結構。α-型多糖沒有藥理活性（藥效）。多數多糖鏈有分支，部分多糖鏈含有小分子膚鏈。多糖鏈分枝密度高或含有膚鏈的其藥理活性也高。靈芝多糖在水溶液中多糖鏈一般由三股糖鏈組成，在 0.1摩/升氫氧化納溶液中時多糖鏈的三股糖鏈離解為單股單糖鏈。

多糖的藥理活性與單糖間糖苷鍵的結合形式有關。單糖間以β-1,3、1,6或β-1,4、1,6-糖苷鍵連接是有效的即具有藥理活性，而純 β-1,4-糖背鍵連接的則沒有藥理活性。此外，多糖的藥理活性還與其立體構形有關，若螺旋形立體結構被破壞，其活性則大大下降。澱粉、纖維素、糊精也是多糖，但其構形與靈芝多糖（或其他真菌多糖）不同。澱粉、纖維素等多糖沒有螺旋形立體結構，單糖間的連接全是β-1,4-連接。纖維素是β-型多糖，澱粉、糊精是α-型多糖。由於其構形不同，所以澱粉、糊精、纖維素都沒有藥理活性。

靈芝多糖是靈芝的最有效成分之一，因此，也特別受到藥科技工作者的重視，對它的研究報道也最多。已分離到的靈芝多糖有200多種，其中有數十種的結構已被搞清，分子量已被測定。

靈芝多糖有多方面的藥理活性 : 能提高機體免疫力，加速血液微循環，提高血液供氧能力，降低機體靜止狀態下的無效耗氧量，消除體內自由基，提高機體細胞膜的封閉度，抗放射，提高肝臟、骨髓、血液合成DNA，RNA，蛋白質的能力，延長壽命等。靈芝的多種藥理活性大多和靈芝多糖有關。

靈芝多糖的生物活性與單糖的連接方式、分枝度及支鏈上羥基取代數量、提取劑、多糖中單糖組成和相對分子質量等有關。靈芝多糖是以β-(1→3)，β-(1→6)連接或者以β-(1→3)，β-(1→4)連接的，且相對分子質量在1×104以上才有生物活性，分枝度高的多糖具有很高的抑癌活性 ^[2]  。

降血糖，降血脂，抗血栓，抗氧化，清除自由基，抗衰老，抗輻射，抗腫瘤，促進血流循環，調節免疫，調節核酸、蛋白質代謝，促進DNA合成，促進人體臍血LAK細胞增殖 ^[1]  。

由於靈芝多糖具有特有的生理活性和臨牀作用，且安全無毒，可廣泛應用於醫藥、食品和化妝品行業。基於靈芝多糖可提高機體免疫力，在癌症病人經放療、化療機體免疫力受損的情況下，與放療、化療配合可達到治癒疾病的目的。另外，靈芝多糖還可抑制過敏反應介質的釋放，從而阻斷非特異性反應的發生，因此又可抑制手術後癌細胞復發和轉移。已投入使用的靈芝製劑有片劑、針劑、沖劑、口服液、糖漿劑和酒劑等，均取得了一定的臨牀療效。靈芝多糖作為功能因子可製成保健食品，也可作為食品添加劑加入飲料、糕點、口服液中，這些都極大地豐富了食品市場。由於靈芝多糖具有抗自由基的功效，可用於化妝品中起延緩衰老的作用 ^[3]  。

⒈菌種：湖南省食用菌研究所提供的韓國靈芝母種。

⒉種子培養基：玉米粉2% 大米粉2%

蔗糖2% 磷酸二氫鉀0.1g

硫酸鎂0.05% ph值自然

⒊發酵培養基：麥麩浸出液10% 葡萄糖2%

硫酸銨0.2%

磷酸二氫鉀0.2% ph值自然

（二）方法 1.種子培養：

⒉發酵培養生產菌絲體。

⒊測定幹、濕菌絲體。

將發酵液進行離心，然後取其沉澱物，加入60%蔗糖，進行高速（3000轉/分）密度梯度離心5分鐘，取上層菌絲體，洗淨蔗糖再壓幹，即得濕菌體，然後再將濕菌體於高温下烘乾即為幹菌體。分別稱取其重量。

⒋多糖的提取。

菌絲體預處理。取適量的靈芝濕菌體，用乙醇等有機溶劑進行處理，以除去濕菌體中的脂類物質，同時使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。

⑵用熱水提取多糖。取上面經預處理的靈芝濕菌體，放入1：20的熱水（95℃）中浸提，一次3小時，連續浸提3次，合併3次的水浸提液減壓、濃縮至一定體積，再用3倍體積的95%乙醇混合，靜置10－12小時，再離心，最後加入75%的乙醇反覆洗滌，以沉澱多糖。此沉澱物為粗多糖，其中混雜有蛋白質、色素、低聚糖等小分子雜質，一般要經過純化。

⑶多糖的純化，去蛋白質和deae纖維素柱層析。去蛋白質一般採用sevag法：加入0.2倍多糖溶液體積的氯仿和0.04倍體積的正丁醇混合振盪半小時進行分離，直至氯仿與水的界面無沉澱為止，且要重複處理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白質。多糖純化一般採用硼酸型deae纖維素柱層析法：取脱蛋白後的多糖，分別以0.025mol/l、0.1mol/l的硼砂，0.1mol/l的氫氧化鈉溶液進行洗脱，然後用0.2%恿銅硫酸液比色測定吸收度，收集有多糖的洗脱液，再濃縮脱鹽即得所需的多糖。

⑷多糖純度的鑑定。

可用電泳法進行鑑定，如果存在單一帶，説明為純多糖。

⒌多糖與多糖中蛋白質含量的測定：

取一定量菌絲體粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag方法脱去蛋白考馬斯亮蘭法測其粗多糖中蛋白質和多糖的含量。測得菌絲體中粗多糖含17.01%、多糖含5.43%、蛋白質含量2.16%。

（一）材料 1.菌種：韓國靈芝栽培種。

⒉子實體栽培生產料：木屑78%，米糠20%，蔗糖1%，石膏1%，ph值自然。

⒈子實體栽培。

⒉靈芝子實體預處理。

⒊子實體多糖的提取。

取適量的靈芝子實體，搗碎成粉末，用80目篩過篩，然後用熱水提取法進行提取。具體操作同菌絲體多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白質等小分子雜質，也須除去。

⒋去除蛋白質和色素。

子實體粗多糖去除蛋白質也採用se陰法。去除色素，目前尚未發現很理想的方法。一般用乙醇進行反覆沖洗，但效果不很理想。

⒌多糖純度的鑑定。

同菌絲體多糖純度的鑑定。

⒍子實體粗多糖、多糖及蛋白質含量的測定。

具體方法同菌絲體多糖及蛋白質含量的測定。測得子實體中粗多糖7.5%、多糖1.5%，蛋白質0.6%，其含量均低於菌絲體中的含量。可見菌絲體階段就形成了靈芝多糖的有效成分，為靈芝液體深層發酵生產菌絲體提供了科學依據。

靈芝多糖由三股單糖鏈構成，其構型與DNA、RNA相似，是一種螺旋狀立體構型物，螺旋層之間主要以氫鍵固定。靈芝多糖在單糖組成、糖苷鍵構型、分子量、旋光度、溶解度等某些理化性質方面存在顯著差異。在已提取到的有200多種靈芝多糖中，大多數是異多糖，即除含有葡萄糖外，還含有半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、鼠李糖等其它單糖；由於來源不同，分子量可從數萬到數十萬不等，多數伴有分支，部分多糖還含有肽鏈。

靈芝多糖體對温度很敏感，是熱敏性物質，大多不溶於高濃度酒精，而溶於熱水。温度升高，會引起靈芝多糖的降解，多糖體中糖苷鍵易斷裂而形成多個唐單體，而唐單體是沒有活性的。現今提取靈芝多糖多采用膜分離法，整個過程在密閉系統中進行，無需加熱，避免和減輕了熱和氧對靈芝多糖營養成分的影響。

靈芝結構緊密，具有較好的維持力，靈芝多糖存在於細胞壁內，較難滲出。研究人員利用超聲波高頻振盪產生“空化效應”能破靈芝結構的維持力，是靈芝的結構層發生變化，擴大透析膜徑，使細胞壁上的多糖儘快釋放。

【性狀】本品為棕褐色或棕黃色粉末，易吸濕 ,易溶於水

【重金屬指標】As<0.3ppm Cd<0.5ppm Pb<1.0ppm Hg<0.2ppm

【衞生指標】 細菌數 < 1000個/g 大腸桿菌、活蟎不得檢出黴菌數 < 100個/g 乾燥失重 ≤9%。

【多糖含量】10%-40%。