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酵母雙雜交體系
鎖定
酵母雙雜交體系(yeast two hybrid system)是一種直接在細胞內外檢測
蛋白質交互作用的方法。
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- 中文名
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酵母雙雜交體系
- 外文名
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yeast two hybrid system
- 釋 義
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一種直接在細胞內外檢測蛋白質交互作用的方法
體系簡介
轉錄因子一般由相對獨立的DNA結合結構域(DNA binding domain，DBD) 和轉錄激活結構域(activation domain，AD) 組成。將蛋白X的基因與DBD的基因融合形成一個雜交體(DBD-X)，將蛋白Y的基因與AD的基因融合形成另一個雜交體(AD-Y)。當這兩個雜交體在同一細胞中表達時，由於蛋白X與蛋白Y能相互結合，使DBD與AD結合在一起，形成一個完整而有活性的轉錄因子，從而激活報告基因的轉錄。在細胞中，單獨DBD雜交體或AD雜交體都不導致報告基因轉錄。通過檢測報告基因是否被轉錄而研究蛋白X、Y之間的相互作用。如果將Y改成基因文庫，那麼即可直接從基因庫中篩選到能與蛋白X相互作用蛋白的DNA序列。
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一般可以使用兩個報告基因，一個是某種
氨基酸合成所必需的基因，通過該基因是否表達在
選擇性培養基上篩選含有相互作用蛋白的酵母另一個基因是lacZ 基因，利用它的顏色反應對由選擇培養篩出來的陽性克隆作進一步篩選，並可通過測定顏色反應的強弱分析蛋白X、Y間相互作用的強弱。酵母雙雜交體系可在細菌、噬菌體或酵母這些生長快速又容易操作的體系中研究哺乳動物細胞的蛋白一蛋白間的相互作用，而且通過篩選DNA 庫就可以直接找到與感興趣的蛋白相互作用的蛋白的DNA 序列。
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- 參考資料
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1.
賀淹才．基因工程概論．David L. Nelson & Michael M. Cox.Lehninger Principles of Biochemistry SEVENTH EDITION.:W. H. Freeman and Company,2017.：清華大學出版社，2008：David L. Nelson & Michael M. Cox.Lehninger Principles of Biochemistry SEVENTH EDITION.:W. H. Freeman and Company,2017.
