調控序列

調控序列就是一段控制基因表達的DNA片段調控序列主要有以下幾種：

①在5′端轉錄起始點上游約20～30個核苷酸的地方，有TATA框(TATA box)。 TATA框是一個短的核苷酸序列，其鹼基順序為TATAATAAT。TATA框是啓動子中的一個順序，它是RNA聚合酶的重要的接觸點，它能夠使酶準確地識別轉錄的起始點並開始轉錄。當TATA框中的鹼基順序有所改變時，mRNA的轉錄就會從不正常的位置開始。

②在5′端轉錄起始點上游約70～80個核苷酸的地方，有CAAT框(CAAT box)。CAAT框是啓動子中另一個短的核苷酸序列，其鹼基順序為GGCTCAATCT。CAAT框是RNA聚合酶的另一個結合點，它的作用還不很肯定，但一般認為它控制着轉錄的起始頻率，而不影響轉錄的起始點。當這段順序被改變後，mRNA的形成量會明顯減少。

③在5′端轉錄起始點上游約100個核苷酸以遠的位置，有些順序可以起到增強轉錄活性的作用，它能使轉錄活性增強上百倍，因此被稱為增強子。當這些順序不存在時，可大大降低轉錄水平。研究表明，增強子通常有組織特異性，這是因為不同細胞核有不同的特異因子與增強子結合，從而對不同組織、器官的基因表達有不同的調控作用。例如，人類胰島素基因 5′末端上游約250個核苷酸處有一組織特異性增強子，在胰島素β細胞中有一種特異性蛋白因子，可以作用於這個區域以增強胰島素基因的轉錄。在其他組織細胞中沒有這種蛋白因子，所以也就沒有此作用。這就是為什麼胰島素基因只有在胰島素β細胞中才能很好表達的重要原因。

④在3′端終止密碼的下游有一個核苷酸順序為AATAAA，這一順序可能對mRNA的加尾(mRNA尾部添加多聚U)有重要作用。這個順序的下游是一個反向重複順序。這個順序經轉錄後可形成一個髮卡結構。髮卡結構阻礙了RNA聚合酶的移動。髮卡結構末尾的一串U與轉錄模板DNA中的一串A之間，因形成的氫鍵結合力較弱，使mRNA 與DNA雜交部分的結合不穩定，mRNA就會從模板上脱落下來，同時，RNA聚合酶也從DNA上解離下來，轉錄終止。AATAAA順序和它下游的反向重複順序合稱為終止子，是轉錄終止的信號

(1) 利用RACE技術反向擴增得到5'端,利用啓動子預測軟件尋找調控序列

(2)利用染色體步移技術反向擴增得到5'端,利用啓動子預測軟件尋找調控序列

(3)構建基因組文庫

(4)隨機酶切基因組為300左右的片段,連接到報告載體,能表達着即為啓動子

2、如何分析調控序列的功能？

(1)隨機酶切基因組為300左右的片段,連接到報告載體,能表達者即為啓動子

(2)對調控序列序列片段進行缺失