薄層層析

將樣品溶液用毛細管點在薄層板的一端，置密閉槽中，加入適宜溶劑為流動相。由於毛細管原理，溶劑被吸上，沿板移動，並帶動樣品中各組分向前移動，這個過程稱為展開。由於各組分性質不同，移動距離不同，展開一定距離後，即得互相分離的組分斑點。可用適當方法使各組分在板上顯示其位置，如組分本身有顏色，即可直接觀察，否則可噴顯色試劑或在紫外燈下觀察熒光等辦法確定

黃芩薄層層析圖譜

斑點位置。通常用比移值Rf表示組分移動的特性，其定義為：

Rf=組分移動的距離/溶劑前沿移動的距離

=原點至組分斑點中心的距離/原點至溶劑前沿的距離。

在薄層、溶劑、温度等各項實驗條件恆定的情況下，各物質的Rf值是不變的，它不隨溶劑移動距離的改變而變化。Rf與分配係數K的關係：

Rf=1/(1+αK)，

α是由薄層性質決定的一個常數。由此可見，K值愈大，溶質分配於固定相的趨勢愈大，而Rf值愈小；反之，K值愈小，則分配於流動相的趨勢愈大，Rf值是定性分析的重要指標。在流動相、固定相和展開條件固定時，Rf值是組分的特性，可用以進行定性鑑別。實用時也常將樣品與已知純物質同時展開，比較二者移動情況，進行定性分析。

可分為洗脱測定法、薄層層析法和原位掃描法：

①洗脱測定法，將展開後的組分斑點處的吸附劑刮下，用適宜溶劑將組分洗脱溶出，然後用適當方法進行定量測定。常用方法為比色法、紫外－可見分光光度法，也可用電化學分析法等。

②原位掃描法，將展開後的薄層板放在光密度計內，以一定波長的光照射，同時使斑點移過光路，由於斑點對光的吸收，可繪出峯形曲線，由峯面積與標準樣品的吸收相比較而求出含量。

薄層層析法以吸附層析使用最為普遍。常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等。薄層層析和其他層析法一樣，除吸附法外，也可進行分配、離子交換、分子排阻等機理的層析，即將鋪制薄層的材料相應換為塗以固定相的載體、離子交換劑、凝膠等，其操作與吸附法基本相同。

制板　鋪制薄層板時，要求基底板潔淨平整，可用幹法或濕法鋪制。現常用濕法制板，即將吸附劑和粘合劑（如燒石膏）按一定比例混合，加入適量水調勻，用塗布器將此勻漿緩慢地移過基底板，放置晾乾，再經適當烘烤活化後即可使用。如不加粘合劑和水，直接將吸附劑均勻地鋪成薄層，則為幹法制板。現在市場上已有各種制好的薄層板出售，統稱預製板。

展開　有多種方式，以上行法最為常用。將薄層板垂直或傾斜放置，將展開溶劑加於低部，使之自下向上移動。下行法則為用濾紙將溶劑引至薄層上端，使其自上向下流動。平行展開時，將板平放，溶劑被吸上至薄層板點有樣品的一端,進行展開。使用圓形薄層板時,將樣品點在圓心附近，使溶劑自圓心向圓周方向移動，稱為環形展開或徑向展開；將樣品點在圓周位置，使溶劑自圓周向圓心移動的為向心展開，適用於f值大的組分的分離。將點樣品處附近的吸附劑颳去，使溶劑只能通過樣品點附近的較窄部分前進展開，因而溶劑前緣呈弧形的展開方式，也稱徑向展開，這種方式對較難分離的組分可能效果好些。

展開一次後取出薄層板使溶劑揮發，再用同一溶劑或換用其他溶劑再次沿此方向展開的稱多次展開。將樣品點在方形薄層板的一角，先沿着一個方向展開，然後將板轉動90°，再沿着另一方向展開的為雙向展開。多次展開和雙向展開都可加強分離效果。

特點　操作簡便，設備簡單，除光密度計外，不需特殊設備，分離效果較好，時間較短，一塊板上可同時分離許多樣品。除低沸點物質外，各種無機和有機化合物都可進行分離。

應用和發展　廣泛應用於石油、化工、醫藥、生化等方面。樣品用量一般為幾至幾百微克，是一種較實用、有效的微量分離分析方法。此法也可用於分離製備較大量的樣品，即使用較大較厚的薄層板，將樣品溶液在起始點處點成條帶狀，這樣可以分離毫克量樣品。

高效液相色譜法是用微細顆粒得到高效分離的辦法，也已用於薄層層析。使用5～10微米的吸附劑制板,可得較好的分離效果,為與一般的薄層層析法相區別,稱為高效薄層層析。其優點是樣品量少(只需納克量樣品)、展開距離小、展開時間短，是薄層層析法的一個重要發展。