葡聚糖凝膠

葡聚糖凝膠G15 100-200;葡聚糖凝膠G15 200-400;葡聚糖凝膠G15 60-100

SEPHADEX G-15, FOR GEL FILTRATION, 40-120MICRON; Sephadex(R) G-15

葡聚糖凝膠不溶於一切溶劑（除非它被化學降解）。它在水、鹽溶液、有機溶劑、鹼和弱酸性溶液中都是穩定的，在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應避免使用。

物理穩定性

葡聚糖凝膠並不熔融，可以在濕態、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。幹態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決於交聯度。

利用分子篩作用，進行多肽分離、脱鹽、清洗生物提取液、分子量測定。

交聯葡聚糖的商品名為Sephndex，不同規格型號的葡聚糖用英文字母G表示，G後面的阿拉伯數為凝膠得水值的10倍。

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度，因此它們的溶脹度和分級分離範圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細級的葡聚糖凝膠是用於需要極高分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用於製備性色譜過程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外，粗級也可用於批量工藝。

1.乙醇浸泡：在室温下，將乾粉浸泡於50-60%乙醇中至少24小時，並不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾幹;

2.無鹽水浸泡：室温下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的完全溶脹，然後；

3.鹽酸浸泡：在常温下再用0.2NHCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾幹，水洗至中性；

4.將溶脹好的凝膠脱氣後（真空抽濾或超聲波）根據裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態裝柱，並避免柱內產生氣泡或斷層；

5.上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止（流出液的PH值等於上柱的Buffer的PH值）；

6.凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱牀體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的牀體積，視分離情況可以調整；脱鹽時上樣量可以達到20%的柱牀體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當儘可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制，脱鹽時高徑比為5：1即可；

7.洗脱方法：可以用無鹽水，也可以採用上柱時的緩衝液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或鹽梯度洗脱也可以完全分離純化；

8.在位清洗（CIP）凝膠使用十次後作一次CIP，目的是去除柱牀內沉澱的及頑固殘留的蛋白。方法是以

40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩衝液再生。

1、未使用，室温保存即可。

2、使用後保存方法如下：凝膠層析的載體不會與被分離的物質發生任何作用，因此凝膠柱在層析分離後稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次後，由於牀體積變小，流動速率降低或雜質污染等原因，使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理，其方法是:先用水反覆進行逆向沖洗，再用緩衝溶液平衡，即可進行下一次分離。對使用過的凝膠，若短時間保存，只要反覆洗滌除去蛋白質等雜質，加入適量防腐劑即可；

3、若長期保存，則需將凝膠從柱中取出，進行洗滌、脱水和乾燥等處理後，裝瓶保存。