葉酸

葉酸是蝶啶的衍生物，最初由肝臟分離出來，後來發現植物的綠葉中含量十分豐富，故名為葉酸。它廣泛地存在於肉類、鮮果、蔬菜中，為黃色結晶狀粉末，無味無臭，其鈉鹽易溶於水，不溶於醇和乙醚及其他有機溶劑，不溶於冷水但稍溶於熱水。在酸性溶液中不穩定，易被光破壞。 ^[2] 

又稱“維生素Bc”和“維生素M”。B族維生素的一種。黃色或橙黃薄片狀或針狀晶體，無臭無味，加熱至約250℃，色漸變深，最後成黑色膠狀物。抗貧血藥，茶葉中含量達50～70μg/100g，對正常紅細胞形成有促進作用。在茶樹物質代謝中，參與甲基的傳送。 ^[3]  也參與體內氨基酸及核酸合成，並與維生素B12共同促進紅血球的生成。用於各種巨幼紅細胞性貧血，尤適用於孕婦及嬰兒巨幼紅細胞性貧血。 ^[4] 

人類腸道細菌能合成葉酸，故一般不易缺乏。當吸收不良、代謝失常或長期使用腸道抑菌藥物時，可造成葉酸缺乏。此外，葉酸還廣泛存在於動植物性食品中，含量豐富的有：內臟、蛋、魚以及梨、蠶豆、甜菜、菠菜、菜花、芹菜、萵苣、柑橘、堅果類和大豆類食品。人體每日攝入葉酸量維持在每天3.1μg/kg時，體內即可有適量葉酸儲備；孕婦每日葉酸總攝入量應大於350μg；嬰兒的安全攝入量按kg體重計與成人相似，即每日3.6μg/kg能滿足生長與維持正常血象的需要。 ^[1] 

1931年，印度孟買產科醫院的醫生L.Wills等人發現，酵母或肝臟濃縮物對妊娠婦女的巨幼紅細胞性貧血症狀有一定的作用，認為這些提取物中有某種抗貧血因子；1935年，有人發現酵母和肝臟提取液對猴子貧血症狀有一定的作用，描述其為VM；1939年，有人在肝中發現了抗擊貧血的因子，稱為VBe；1941年H.K.Mitchell等人發現菠菜中有乳酸鏈球菌的一個因子，稱作葉酸。1945年，R.B.Angier等人在合成蝶酰穀氨酸時，發現以上所有的因子都是同一種物質，並完成了結構測定，之後常稱之為葉酸。所以，葉酸又叫維生素B9、抗貧血因子、蝶酰穀氨酸等。 ^[5] 

葉酸（Folic Acid）是一組化學結構相似，生化特徵相近的化合物的統稱，由蝶啶、對氨基苯甲酸與1個或多個穀氨酸結合而成。 ^[6] 

葉酸亦稱維生素M，是淡橙黃色結晶或是薄片，分子式是C₁₉H₁₉N₇O₆，分子量是441.4，熔點是250℃，溶於熱稀鹽酸和硫磺，略溶於乙酸、酚吡啶、氫氧化鹼及碳酸鹼溶液，在乙醇、丁醇、醚、丙酮、氯仿和苯溶液中不溶。 ^[6] 

在生物體中，蛋白質、核苷酸、泛酸的合成及分子的甲基化都需要一碳單位的參與，而葉酸是介導一碳單位轉移極其重要的輔助因子，葉酸主要參與了嘌呤和嘧啶的從頭合成。葉酸因吡嗪環上有不同形式的取代物及其鄰位—氨基苯甲酰穀氨酸部分結合不同數量的穀氨酸殘基而形成了不同形式的葉酸：

（1）吡嗪環被部分還原——二氫葉酸；

（2）吡嗪環被完全還原——四氫葉酸；

（3）吡嗪環被甲酸氧化——5-甲酰基-四氫葉酸或10-甲酰基-四氫葉酸或5，10-次甲基-四氫葉酸；

（4）吡嗪環被甲醛氧化——5，10-亞甲基-四氫葉酸；

（5）吡嗪環被甲醇氧化——5-甲基-四氫葉酸。四氫葉酸（TFH）是其在體內最活潑形式，因為四氫葉酸是多谷氨酰化的最適底物。 ^[6] 

進入機體的葉酸在二氫葉酸還原酶作用下轉變為二氫葉酸，進而轉化為四氫葉酸；在絲氨酸羥甲基轉移酶的作用下，四氫葉酸活化為5，10-亞甲基四氫葉酸，該反應是可逆的；在亞甲基四氫葉酸還原酶的作用下，5，10-亞甲基四氫葉酸轉化為5-甲基四氫葉酸；同型半胱氨酸、維生素B12，在蛋氨酸合成酶作用下，5-甲基四氫葉酸為其提供甲基，合成蛋氨酸。 ^[6] 

葉酸對生物體的作用主要表現在以下幾個方面：參與遺傳物質和蛋白質的代謝；影響動物繁殖性能；影響動物胰腺的分泌；促進動物的生長；提高機體免疫力。葉酸缺乏的可能原因包括攝入量不足；需要量增加；腸道吸收障礙；維生素C缺乏；使用葉酸拮抗藥；肝臟疾病等。 ^[6] 

葉酸廣泛分佈於綠葉植物中，如菠菜、甜菜、硬花甘藍等綠葉蔬菜，在動物性食品（肝臟、腎、蛋黃等）、水果（柑橘、獼猴桃等）和酵母中也廣泛存在，但在根莖類蔬菜、玉米、米、豬肉中含量較少。但是在這些綠葉蔬菜中，葉酸含量較高的主要是東風菜、馬蹄葉、山尖子菜、柳蒿芽、刺五加皮、野蘆筍，含量分別是36.195、23.478、20.137、67.600、59.553、22.032μg/g。 ^[6] 

進入機體內的多穀氨酸形式的葉酸必須降解為遊離葉酸，方可被機體吸收。對多穀氨酸葉酸起水解作用的是小腸黏膜上皮中的γ-L-谷氨酰羧肽酶。葉酸結合蛋白在葉酸的消化、分佈和貯存起關鍵作用。已發現的葉酸結合蛋白有三類：高親和力葉酸結合蛋白、與膜有關的結合蛋白和細胞質結合蛋白。高親和力葉酸結合蛋白保護了葉酸在血液中的穩定存在，還可能控制了血漿中葉酸鹽分佈的專一性。 ^[6] 

一般情況下，正常人的需要量為100~200μg/d，世界衞生組織的推薦量為：成人200μg/d，孕婦和乳母400μg/d。FDA的最新葉酸食用量標準如下：25歲～50歲（男性）為240μg/d；25歲～50歲（女性）為190μg/d；乳母、孕婦為400μg/d；嬰幼兒為200～400μg/d。 ^[6] 

葉酸作為機體細胞生長和繁殖必不可少的維生素之一，缺乏會對人體正常的生理活動產生影響。許多文獻報道，缺乏葉酸與神經管畸形、巨幼細胞貧血、唇齶裂、抑鬱症、腫瘤等疾病有直接關係。 ^[5] 

神經管畸形（NTDs）是胚胎在發育過程中神經管閉合不全而引起的一組缺陷，包括無腦兒、腦膨出、脊柱裂等，是最常見的新生兒缺陷疾病之一。世界範圍內NTDs發病率約為千分之零點五至千分之二。我國是NTDs的高發國家，每年約有10萬左右例NTDs患兒出生，發病率高達千分之二點七四。NTDs給家庭和社會帶來沉重的壓力和負擔。 ^[5] 

NTDs的發病主要由基因與環境的相互作用導致。1991年，英國醫學研究委員會才首次證實了妊娠前後補充葉酸可預防NTDs的發生，降低50-70%的發病率。葉酸對NTDs的預防作用已被認為是20世紀後期最令人激動的醫學發現之一。1995年，我國衞生局提倡新婚和準備生育的婦女服用葉酸增補劑，使“九五”期間我國NTDs的發生率下降50%。2000年，中國營養協會建議育齡婦女每日膳食中葉酸的推薦攝入量為400微克，各階段的產婦為每天600微克。葉酸的每日最高允許攝入量均為1000微克。 ^[5] 

巨幼細胞貧血（MA）是由於缺乏葉酸或維生素B12而引起的脱氧核糖核酸合成障礙而導致的一種貧血，以嬰孩與孕婦多見。正常發育的胎兒要求母親體內有大量的葉酸儲備，如果在臨產或產後早期葉酸儲備耗盡，導致胎兒和母親巨幼細胞貧血。補充葉酸後，本病可迅速恢復和治癒。 ^[5] 

唇齶裂（CLP）是最常見的先天性出生缺陷崎形之一，尤其是在中國的發病率高達千分之一點八二，我國平均每年約有4~5萬唇齶裂患兒出生。唇齶裂的發病原因還不明確，事實證明母孕早期補充葉酸可預防唇齶裂兒的出生。有學者研究了179例唇齶裂家庭和204例對照家庭，發現未補充葉酸或者低葉酸飲食的母親，生出唇齶裂孩子的風險比正常補充葉酸的家庭大約高6倍。 ^[5] 

葉酸缺乏會給母親和孩子帶來很大傷害，例如，習慣性流產、早產、嬰兒出生體重過低、胎兒消化不良及生長遲緩等。許多文獻報道，老年期痴呆症、抑鬱症及新生兒的神經系統發生異常等有關腦病變疾病，都與葉酸的缺乏有着一定的關聯。另外，缺乏葉酸還可能引起腫瘤（子宮癌、支氣管癌、食道癌、大腸癌等）、慢性萎縮性胃炎、結腸炎、冠心病和腦血管疾病等多種疾病，以及其他如舌炎、生長不良、智力退化等症狀。成年人若缺乏葉酸又飲酒過量可能會改變其腸黏膜的結構。 ^[5] 

葉酸對以上疾病均有預防的治療作用，除了NTDs外，補充葉酸即可使機體恢復健康，這種葉酸與疾病間的可逆關係在臨牀上非常重要。 ^[5] 

傳統的葉酸合成方法是利用硝基苯甲酸，經過酰氯化、縮合、還原、環合四個步驟最終得到葉酸。該方法雖然可合成葉酸，但合成路線複雜，生產時間長，生產成本高，且收率低，不利於大規模生產。反應方程式如圖1.1所示 ^[7]  ：

1994年，C·維爾利等人提出以2-羥基丙二醛為中間體，採用一鍋法合成葉酸。2-取代丙二醛存在Ⅰa和Ⅰb兩種互變異構形式如圖1.2所示 ^[7]  ：

用2-羥基丙二醛與兩分子的L-N-對氨基苯甲酰穀氨酸反應得到相應的二亞胺結構，然後在亞硫酸鹽的存在下，於pH值為3～8，温度為0～100℃的條件下與6-羥基-2，4，5-三氨基嘧啶反應制得葉酸。該反應可在水溶液中進行，也可在與水混溶的惰性有機溶劑如乙腈、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、甲醇、乙醇溶劑中進行。優先選擇以水為溶劑，當使用混合溶劑時，惰性溶劑應與水混溶，且水含量應該大於30%。反應式如圖1.3所示 ^[7]  ：

具體操作如下：氮氣保護下，將5.32g對氨基苯甲酰穀氨酸、20mL 0.1 mol/L HCl加入100mL的五口瓶中，再加入0.88g 2-羥基丙二醛和3mL水，室温攪拌1h。然後加入2.52g Na₂SO₃攪拌升温至38℃，將2.39g三氨基嘧啶硫酸鹽在1h內分批加入反應瓶，用2mol/L的Na₂CO₃溶液調pH值維持在6.0，反應4h結束。用醋酸調節反應液pH至3.0，析出葉酸沉澱，過濾，得到3.08g葉酸粗品，純化後收率63.5%。 ^[7] 

該方法雖然收率有所提高，但其生產成本很高，需氮氣保護，且2-羥基丙二醛難於製備。 ^[7] 

C·維爾利等人再次嘗試，用1，1，3，3-四甲氧基丙醇在酸性條件下水解得到2-羥基丙二醛，如圖1.4所示。2-羥基丙二醛與對-氨基苯甲酰基-L-穀氨酸反應得到了相應的二亞胺固體，然後將製得的二亞胺固體與三氨基嘧啶硫酸鹽反應制得葉酸。此工藝雖然和硝基苯甲酸生成葉酸的方法比較，合成步驟簡單易行，且收率較高，但製得的葉酸粗品提純操作較為複雜，需要利用硅膠柱進行分離操作，無法應用於大規模生產。 ^[7] 

1948年，Hultquist等用1，1，3-三氯丙酮與2，4，5-三氨基-6-羥基嘧啶縮合製得4-氨基-4-羥基-6-氯代甲基蝶啶，如圖1.9所示： ^[7] 

現國內主要以三氯丙酮、2，4，5-三氨基-6-羥基嘧啶硫酸鹽和對氨基苯甲酰穀氨酸為原料合成葉酸。將三氯丙酮、L-N-對氨基苯甲酰穀氨酸、6-羥基-2，4，5-三氨基嘧啶硫酸鹽在焦亞硫酸鈉和碳酸鈉存在下，保持pH3.0～3.5，於40～45℃的反應温度條件下，反應5h，得葉酸。反應方程式如圖1.10所示： ^[7] 

此操作工藝簡單，反應時間短，條件容易控制，生產成本低。但存在廢水廢氣量大的缺點。在生產三氯丙酮的過程中也存在較大污染，主要存在以下兩方面問題。 ^[7] 

（1）廢水污染嚴重。製得的氯代混合物需用大量水進行水提操作，以得到濃度可用於生產的三氯丙酮水提液，致使產生大量廢水。 ^[7] 

（2）廢氣污染嚴重。工廠普遍採用丙酮和氯氣反應制備三氯丙酮，同時生成大量氯化氫氣體。對這些廢氣如不充分回收處理，將導致嚴重的廢氣污染。 ^[7] 

除製備三氯丙酮存在廢水和廢氣的污染，在合成葉酸的步驟中，同樣存在此類問題。由於2，4，5-三氨基-6-羥基嘧啶硫酸鹽的溶解性差，反應過程中水量較大，滴加的三氯丙酮水提液也在反應體系中帶入大量水。除此之外，在最後的提純操作中，需進行酸溶水析，這些操作共同導致整體反應廢水污染嚴重。 ^[7] 

研究表明，添加2.5mg/kg葉酸，仔豬的全期日增重較基礎日糧組有顯著提高，血清中蛋白質濃度，肝臟中DNA、RNA及蛋白質含量都有顯著升高，血清中尿素氮濃度極顯著降低。同時，也得出更高水平的葉酸添加劑量反而降低了仔豬生長性能。 ^[6] 

有學者研究發現葉酸的補充對初產母豬繁殖性能無顯著影響，但是極顯著提高初產母豬和新生仔豬血清中葉酸含量。葉酸作為一碳單位代謝重要的輔助因子，能夠降低血漿同型半胱氨酸含量，從而改善脂質過氧化。蛋白質組學分析表明：葉酸對大鼠肝臟的抗氧化酶表達量及其活力都有顯著影響。 ^[6] 

葉酸在反芻動物上的研究較少，一般認為反芻動物的瘤胃微生物可以合成葉酸並很好地利用，但是Girard等認為，經產乳牛在妊娠階段對葉酸的需要量很大，仍需要從日糧中添加。在高產乳牛的組織代謝中，葉酸和膽鹼可以為乳牛體組織提供一碳基團，用於能量與蛋白質代謝、嘌呤與DNA的合成，從而改善乳牛的生產性能。 ^[6] 

有學者在肉雜雞日糧中分別添加1.64、2.14和2.64mg/kg葉酸，結果1.64mg/kg的添加量顯著提高了肉雜雞的採食量和平均日增重，並顯著提高了其血清中果糖胺的含量，2.64mg/kg水添加量則顯著提高了肉雜雞血清尿酸的含量；葉酸的添加能顯著提高21日齡肉仔雞血清蛋白質的含量，3.0mg/kg水平的添加量還能顯著提高肉仔雞的採食量和平均日增重，並能顯著降低料重比，且發現葉酸與煙酸聯用能極顯著提高肉仔雞的平均日增重；另有研究表明煙酸與葉酸聯用能顯著降低肉仔雞的腹脂重和腹脂率，顯著提高胸肌重、腿肌重和腿肌率，並能顯著提高肉仔雞的胸腺指數、脾臟指數和法氏囊指數，還能在一定程度上提高血清中免疫球蛋白的含量，顯著降低血清中的膽固醇含量，且能提高幹物質、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、有機物和無氮浸出物的表觀消化率。 ^[8] 

現有的研究報道都表明葉酸對人類的健康有着極其重要的作用。葉酸缺乏會導致新生兒神經畸形，血栓閉塞性心、腦血管疾病，厭食症與神經性厭食症，巨幼紅細胞貧血，老年血管性痴呆，抑鬱症等疾病的危險。 ^[6] 

有學者對美國人在2003-2006年從飲食、營養保健品中補充葉酸的研究表明，育齡婦女的葉酸攝入量是必須改進的。在NTDs高發地區，每日提供給孕婦的葉酸僅為100μg，遠低於孕婦每日需要量。 ^[6] 

對加拿大哺乳期婦女飲食中攝入葉酸量對血液葉酸含量影響的調查研究中，得出哺乳期婦女應該每天攝入的葉酸量為400μg。葉酸在調控神經生成和程序性細胞死亡中起重要作用。 ^[6] 

在美國食品中葉酸的強化補充使有神經閉合缺陷嬰兒的出生率下降了19%，但並不排除其他因素對此降低產生的作用。 ^[6] 

0.4毫克葉酸用於預防胎兒神經管畸形，斯利安葉酸項目研究，經過全國25萬例中美預防神經管畸形合作項目驗證，準媽媽在備孕期間就服用0.4毫克葉酸可以下降胎兒神經管畸形率85%，此項結果至今被全球50多個國家廣泛應用。5毫克葉酸是用來治療女性貧血，消費者在選擇購買時一定要認真看好説明書，根據不同情況進行選擇 ^[9]  。

葉酸除了對於預防嬰兒發生神經閉合不完全有效果之外，在人類一些常見疾病的預防中也起到了一定的作用。 ^[6] 

血漿中同型半胱氨酸濃度的升高會導致血栓閉塞性心、腦血管疾病，厭食症與神經性厭食症，老年血管性痴呆，抑鬱症等疾病的發生。在同型半胱氨酸的循環代謝中，葉酸是重要的輔助因子，葉酸經過活化可以轉化成 5，10-亞甲基四氫葉酸，為同型半胱氨酸轉化為蛋氨酸提供甲基。葉酸缺乏使大量的同型半胱氨酸蓄積，排到細胞外造成血漿中同型半胱氨酸濃度升高，導致疾病。研究表明，葉酸強化食品的食用對中老年人血清葉酸水平的提高有本質性聯繫。葉酸可以降低無痛風史人羣患痛風的幾率。葉酸缺乏會出現機體多系統受損，在消化系統主要是會發生結腸炎、慢性萎縮性胃炎，增加結腸癌和胃癌的危險。葉酸補充劑能夠抑制結腸直腸癌的複發率。

研究表明，一定濃度的葉酸可以通過影響葉酸代謝而抑制卵巢癌細胞的生長，葉酸可能是增強化療藥物對卵巢癌的細胞毒性作用，從而增強卵巢癌化療敏感性。 ^[6] 

本品為N-[4-[(2-氨基-氧代-1,4-二氫-6-喋啶)甲氨基]苯甲酰基-L-穀氨酸，按無水物計算，含C₁₉H₁₉N₇O₆應為95.0%~102.0%。

本品為黃色至橙黃色結晶性粉末，無臭。

本品在水、乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中不溶，在氫氧化鈉試液或10%碳酸鈉溶液中易溶。

取本品，精密稱定，加0.1mol/L的氫氧化鈉溶液溶解並定量稀釋製成每1mL中約含10mg的溶液，依法測定（通則0621），比旋度為+18°至+22°。

1、取本品約0.2mg，加0.4%氫氧化鈉溶液10mL，振搖使溶解，加高錳酸鉀試液1滴，振搖混勻後，溶液顯藍綠色，在紫外光燈下，顯藍綠色熒光。

2、取本品，加0.4%氫氧化鈉溶液製成每1mL中約含10µg的溶液，照紫外-可見分光光度法（通則0401）測定，在256nm、283nm與365nm±4nm的波長處有最大吸收，在256nm與365nm波長處的吸光度比值應為2.8~3.0。

3、本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜（光譜集93圖）一致。

照高效液相色譜法（通則0512）測定，避光操作。

供試品溶液：取本品約100mg，置100mL量瓶中，加氨試液約1mL使溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

對照溶液：精密量取供試品溶液1mL，置100mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

系統適用性溶液：取蝶酸10mg，置100mL量瓶中，加0.1mol/L碳酸鈉溶液5mL與供試品溶液10mL，加流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩衝液（pH5.0）（取磷酸二氫鉀2.0g，加水約650mL溶解，加0.5mol/L四丁基氫氧化銨的甲醇溶液15mL、1mol/L磷酸溶液7mL與甲醇270mL，放冷，用1mol/L磷酸溶液或氨試液調節pH值至5.0，用水稀釋至1000mL）為流動相，檢測波長為280nm，流速為每分鐘1.2mL，進樣體積10µL。

系統適用性要求：系統適用性溶液色譜圖中，蝶酸峯與葉酸峯之間的分離度應大於4.0。

測定法：精密量取供試品溶液與對照溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峯保留時間的3倍。

限度：供試品溶液的色譜圖中，蝶酸與其他單個雜質峯面積均不得大於對照溶液主峯面積的0.6倍（0.6%），除蝶酸峯外各雜質峯面積之和不得大於對照溶液主峯面積的2倍（2.0%），小於對照溶液主峯面積0.05倍的峯忽略不計。

取本品約0.1g，精密稱定，加三氯甲烷-無水甲醇（4:1）5mL，照水分測定法（通則0832第一法1）測定，含水分不得過8.5%。

不得過0.1%（通則0841）。

照高效液相色譜法（通則0512）測定，避光操作。

取本品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加0.5%氨溶液約30mL溶解後，用水稀釋至刻度，搖勻。

取葉酸對照品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加0.5%氨溶液約30mL溶解後，用水稀釋至刻度，搖勻。

見有關物質項下。

精密量取供試品溶液與對照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峯面積計算。

維生素類藥。

遮光，密封保存。

葉酸片。 ^[10] 

S24/25：Avoid contact with skin and eyes.

避免皮膚和眼睛接觸。

R33：Danger of cumulative effects.

有累積效應的危險品。

R62：Risk of impaired fertility.

有損害生育能力的危險。

R68：Possible risk of irreversible effects.

可能有不可逆後果的危險。