花葯培養

用於花葯或花粉培養的供體植株，在生長條件下，從幼年的植株取出花葯。由於花粉發育時期和花蕾的某些外部形態特徵（如花冠筒長度和花冠露出花萼的時間等）之間的大致的相關性，因此可以利用這些外部標誌，去選擇大致處於所需要時期的花蕾。但在實驗中必須由每個花蕾取出一個花葯，通過鏡檢確定花粉發育的準確時期。在水稻中，以單核靠邊期的花粉對誘導單倍體植株較為適宜，在外部形態上可根據葉枕距為5~15cm，穎片淡黃綠色、雄蕊長度接近穎片長度的1/2這些條件鑑定。在取穗前先將旗葉鞘用70%酒精擦洗一遍。在超淨工作台內剝去旗內鞘，取出稻穗，放入10%漂白粉溶液中消毒10min，換無菌水洗一次。在取花葯之前用70%酒精將手擦洗兩遍。取花葯時左手持穗，右手用鑷子從穎殼中取出花葯，放在無菌培養皿中，待花葯有一定數目時，用接種環將他們接種到培養基上。培養5天后，花葯逐漸變為黑褐色，20天左右花葯裂開，從中長出淡黃色的花粉愈傷組織，以後先形成芽，後長出根，形成幼苗。

煙草花葯培養的最適取樣期是花粉為單核期的花蕾，此時花蕾的花冠大約與萼片等長。蘆筍花葯培養的最適取樣期也是單核期的花粉，花蕾長2~2.5mm，選取一級側枝的花蕾較為合適，因為在一級側枝的花蕾發育良好，數量大，發育同步。煙草花葯消毒方法基本與水稻花葯培養相同。

必須注意整個操作過程中不應使花葯受到損傷，若受到損傷，則應淘汰，因為損傷常常會刺激花粉壁形成二倍體的愈傷組織。