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考馬斯亮藍
鎖定
考馬斯亮藍(coomassie brilliant blue)一定範圍內與蛋白質濃度成正比,因此可用於蛋白質的定量測定。
- 中文名
- 考馬斯亮藍
- 外文名
- coomassie brilliant blue
- 分 類
- G-250和R-250
考馬斯亮藍化學性質
分子結構如圖《Coomassie brilliant blue G-250》。
考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。
遊離狀態的考馬斯亮藍G250 在酸性溶液中呈紅棕色
[1]
,與蛋白質結合後呈藍色,蛋白質含量與顏色的深淺成正比,經595nm 測定,可作出蛋白質含量與吸光度值的標準曲線,並求出未知樣品的蛋白質濃度。R-250呈藍色,有輕微紅色。
考馬斯亮藍染色
蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室温下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立,試劑配製簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質含量,測定蛋白質濃度範圍為0~1 000μg/mL,是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。
考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。其中考馬斯亮藍G-250由於與蛋白質的結合反應十分迅速,常用來作為蛋白質含量的測定。考馬斯亮藍R-250與蛋白質反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
考馬斯亮藍測定含量
考馬斯亮藍簡介
該方法用於大多數蛋白質的定量是比較精確的,但不適用於小分子鹼性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0.2%影響測定結果,如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用於細胞骨架的檢驗。
考馬斯亮藍濃染液
將100mg考馬斯亮藍G-250溶於50mL 95%乙醇,加入100mL 85%的磷酸,然後,用蒸餾水補充至1000mL,此染液放4℃至少6個月保持穩定。
考馬斯亮藍樣本準備
儘量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品,例如測定抗體,可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的,也可用抗體作為標準蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之間繪製標準曲線。
考馬斯亮藍溶解
將待測樣本溶於100~1緩衝溶液中,該緩衝溶液應與製作標準曲線的緩衝溶液相同(最好用PBS)。
考馬斯亮藍稀釋
按1:5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液,如出現沉澱,過濾除去。
考馬斯亮藍作用
每個樣本加5mL稀釋的染料結合溶液,作用5~30min。染液與蛋白質結合後,將由紅色變為藍色,在595nm波長下測定其吸光度。注意,顯色反應不得超過30min。
考馬斯亮藍計算
根據標準曲線計算待測樣本的濃度。
考馬斯亮藍沾到皮膚後的處理方法
考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質通過範德華力結合,反應快速,並且穩定,無法用普通試劑洗掉。待一兩週左右,皮屑細胞自然衰老脱落即可無礙。
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