細胞實驗指南

本書內容豐富，包括從無脊椎動物到脊椎動物細胞的基本培養方法，細胞器的分離及生化分析，光學顯微鏡及電子顯微鏡水平的蛋白質定位，最近發展的共聚焦、去捲曲、多光子顯微鏡技術，活細胞的蛋白質動力學研究以及一系列進行蛋白質和大分子複合物顯微鏡研究的最先進技術方法，單拷貝基因及其轉錄產物的定位和原位雜交等，實為每個進行細胞和組織生物學研究的實驗室乃至任何生命科學實驗室所不可少的。

本書與備受稱讚的冷泉港實驗室出版社的《分子克隆實驗指南》和《抗體技術實驗指南》具有同樣的特點，對即使具有多年工作經驗的研究者也極其有用。本書可供在不同領域從事生命科學研究的人員參考。

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第一卷：細胞的培養及生物化學分析

第1章 細胞的培養及分析

第1節 哺乳動物細胞培養

第2節 培養中細胞的生長及調控

第3節 作為細胞和組織培養中底物的細胞外基質成分

第4節 成纖維細胞的分離和培養

第5節 上皮細胞的培養

第6節 人毛細血管內皮細胞的分離

第7節 淋巴細胞的分離與轉化

第8節 鼠胚幹細胞的培養和體外分化

第9節 原代神經細胞的分離和培養

第10節 雞胚胎成肌細胞的分離和培養

第11節 新生大鼠心臟細胞的分離和培養

第12節 成年大鼠心室肌肉細胞的分離和培養

第13節 體細胞融合

第14節 細胞同步化

第15節 凋亡分析

第16節 流式細胞計量術

第17節 纖毛類原生動物腹纖毛類的培養和使用

第18節 四膜蟲的培養和操作

第19節 衣藻的培養和遺傳分析

第20節 盤基網柄菌的培養和分析

第21節 釀酒酵母的培養和轉化

第22節 非洲粟酒裂殖酵母的培養和轉化

第23節 海洋無脊椎動物胚胎的培養

第2章 代謝標記和蛋白質修飾

第24節 用32P-磷酸穩態標記HeLa細胞

第25節 mRNA體外細胞核連綴轉錄分析

第26節 蛋白質的代謝放射標記

第27節 32P代謝標記細胞研究蛋白質的磷酸化

第28節 利用透化細胞與細胞器研究蛋白質的磷酸化

第29節 用外源底物進行蛋白質激酶分析??

第30節 激酶的動力學：應用於雙相底物酶的簡單酶動力學

第31節 磷酸酶的簡單製備

第32節 蛋白質的甲基化和異戊烯化作用

第33節 蛋白質的糖基化

第3章 亞細胞的分離

第34節 亞細胞的分離

第35節 用陽離子硅膠分離技術分離細胞膜

第36節 橋粒的分離

第37節 粗微體的亞細胞分離

第38節 核糖體、核糖體亞基和多核糖體的純化

第39節 高爾基體的分離和分析

第40節 從哺乳動物組織中分離過氧化物酶體(微體)

第41節 從細胞、組織中分離線粒體

第42節 完整葉綠體的分離

第43節 從組織或懸浮培養物中製備細胞核

第44節 細胞核基質：用於顯微和生化分析的製備

第45節 用於細胞核蛋白輸入的細胞滲透方法

第46節 利用瞬時種間異核體分析核質穿梭

第47節 核纖層以及富含核纖層組分的製備和鑑定

第48節 分離核仁

第49節 用於生化和形態分析的染色體制備

第50節 DNA的純化和Southern印跡分析

第51節 細胞和組織總RNA的純化和Northern印跡分析

第52節 非洲爪蟾生髮泡內含物的塗布製備

第53節 從肌肉和非肌肉細胞中純化肌球蛋白和肌動蛋白

第54節 微管、微管相關蛋白和微管依賴的運動蛋白的分離

第55節 中間絲的分離和純化

第4章 蛋白質鑑定與分析

第56節 蛋白質濃度的測定

第57節 蛋白質單-雙向凝膠電泳

第58節 蛋白質雙向凝膠電泳

第59節 蛋白質染色檢測

第60節 蛋白質的放射自顯影、熒光顯影和磷光成像檢測

第61節 一維和二維肽圖

第62節 肽的RP-HPLC圖譜和純化

第63節 蛋白質和肽的序列分析

第5章 蛋白質表達和相互間作用

第64節 T7表達系統的蛋白產生

第65節 用GST基因融合載體表達和純化蛋白質

第66節 桿狀病毒表達：利用桿狀病毒穿梭載體在大腸桿菌中產生重組桿狀病毒DNA

第67節 哺乳動物表達載體

第68節 哺乳動物細胞中進行基因的誘導表達

第69節 雙雜交系統/相互作用陷阱

第6章 在細胞生物學中作為工具的抗體

第70節 抗體純化和標記概述

第71節 表位標記

第72節 免疫沉澱

第73節 免疫印跡法和免疫印跡親和純化

第74節 人類自身抗體及其靶抗原的特性

下冊

第二卷：光學顯微鏡及細胞結構

第7章 活細胞和細胞週期的觀察

第75節 用光學顯微鏡觀察活細胞

第76節 用熒光技術監測體內分子動力學

第77節 噬動軌跡法分析組織培養中細胞的運動

第78節 綠色熒光蛋白的異源表達

第79節 熒光漂白技術

第80節 活細胞中胞內自由鈣的成像和檢測

第81節 光學鑷子的構造

第8章 大分子的製備和導入細

第82節 抗體和DNA探針的熒光標記

第83節 活體細胞的定量微注射

第84節 爪蟾卵細胞和胚胎的注射

第85節 齧齒類動物肌肉直接注射DNA

第86節 哺乳動物細胞轉染DNA

第87節 利用陽離子型脂質體將DNA導入哺乳動物細胞

第88節 電穿孔和電融合

第89節 反義寡核苷酸的傳遞

第90節 腺病毒表達載體的用途和使用方法

第91節 複製缺陷型皰疹病毒擴增子載體及其在基因轉移中的應用

第92節 反轉錄病毒介導的基因轉導

第93節 使用反轉錄病毒載體進行譜系分析

第9章 光學顯微鏡和表面熒光顯微鏡

第94節 光學顯微鏡

第95節 視頻顯微鏡和圖像增強

第10章 共焦顯微技術、多光子顯微技術及去旋方法

第96節 共焦顯微技術及去旋技術

第97節 多光子激發熒光顯微技術

第三卷：基因及其產物的亞細胞定位

第11章 細胞器、蛋白質和基因表達的顯像

第98節 進行熒光顯微鏡觀察的細胞和組織標本的製備

第99節 組織中的β-半乳糖苷酶和鹼性磷酸酶活性檢測

第100節 用酶檢測法進行蛋白質的免疫定位

第101節 細胞結構的非免疫熒光標記

第102節 免疫熒光顯微術簡介

第103節 微管、微管相關蛋白和中間纖維的免疫染色

第104節 肌動蛋白的免疫熒光定位

第105節 核蛋白的免疫熒光定位

第106節 釀酒酵母的免疫熒光方法

第107節 果蠅組織的免疫熒光方法

第108節 線蟲的免疫熒光方法

第109節 DNA複製的分析：非同位素標記方法

第110節 RNA合成的分析：非同位素標記方法

第12章 原位雜交

第111節 DNA熒光原位雜交

第112節 染色體比較雜交

第113節 光譜核型分析法分析染色體

第114節 用3H標記探針對組織碎片標本DNA和核RNA進行原位雜交

第115節 果蠅染色體DNA的整體熒光原位雜交

第116節 RNA原位雜交

第117節 脊椎動物胚胎和分離器官的RNA整體原位檢測

第118節 爪蛙胚胎RNA的整體原位檢測

第119節 原位PCR

第13章 電子顯微術

第120節 利用透射電子顯微術成像

第121節 透射電子顯微鏡的樣品製備方法

第122節 用掃描電子顯微術成像

第123節 掃描電子顯微鐿的樣品製備方法

第124節 掃描式透射電子顯微術

第125節 DNA及DNA結合蛋白的電子顯微術

第126節 核酸和核蛋白複合物的快速印跡法

第127節 電鏡的細胞化學染色及酶檢測??

第128節 免疫電鏡技術

第129節 細胞和分子的快速冷凍

第130節 冷凍置換

第131節 超薄低温切片的免疫細胞化學

第132節 冷凍斷裂和冷凍斷裂細胞化學

附錄1 細胞生物學常用儲存液、緩衝液及培養基

附錄2 細胞生物學基本數據與資料

附錄3 顯微鏡技術：鏡頭、濾光片及發射/激發譜

附錄4 亞細胞組分的定位標誌

附錄5 化學試劑安全注意事項

附錄6 供應廠商