-
硫酸銨沉澱
鎖定
硫酸銨沉澱（ammonium sulfate），又稱為硫酸銨沉澱法，是一種純化抗體的化學方法。
- 中文名稱
- 硫酸銨沉澱
- 英文名稱
- ammonium sulfate precipitation
- 定 義
- 用不同濃度硫酸銨溶液對蛋白質進行沉澱和分離的技術。常用於分離免疫球蛋白。
- 應用學科
- 免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫學檢測和診斷（三級學科）
以上內容由全國科學技術名詞審定委員會審定公佈
- 中文名
- 硫酸銨沉澱
- 外文名
- ammonium sulfate
- 別 名
- 硫酸銨沉澱法
硫酸銨沉澱試劑及儀器
組織培養上清液、血清樣品或腹水等 2. 硫酸銨（ NH 4 ） SO 4 3. 飽和硫酸銨溶液（ SAS ） 4. 蒸餾水 5. PBS( 含 0.2g /L 疊氮鈉 ) 6. 透析袋 7. 超速離心機 8. pH 計 9. 磁力攪拌器
硫酸銨沉澱操作步驟
以腹水或組織培養上清液為例來介紹抗體的硫酸銨沉澱。各種不同的免疫球蛋白鹽析所需硫酸 銨的飽和度也不完全相同。通常用來分離抗體的硫酸銨飽和度為 33% — 50% 。
配製飽和硫酸銨溶液
（ SAS ） 1.將 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 邊攪拌邊慢慢加到 1 升 蒸餾水中。用氨水或硫酸調到硫酸pH7.0 。此即飽和度為 100% 的硫酸銨溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）. 2.其它不同飽和度銨溶液的配製
沉澱
1.樣品（如腹水） 20 000 ′ g 離心 30 min ，除去細胞碎片； 2.保留上清液並測量體積； 3.邊攪拌邊慢慢加入等體積的 SAS 到上清液中，終濃度為 1 ： 1 4.將溶液放在磁力攪拌器上攪拌 6 小時或攪拌過夜（4 ° C），使蛋白質充分沉澱
透析
1.蛋白質溶液 10 000 ′ g 離心 30 min （ 4 ° C ）。棄上清保留沉澱； 2.將沉澱溶於少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 疊氮鈉中。沉澱溶解後放入透析袋對 PBS -0.2g /L 疊氮鈉透析 24-48 小時（ 4 ° C ），每隔 3-6 小時換透析緩衝液一次，以徹底除去硫酸氨； 3.透析液離心，測定上清液中蛋白質含量。 四，
硫酸銨沉澱應用提示
（一） 先用較低濃度的硫酸氨預沉澱，除去樣品中的雜蛋白。 1.邊攪拌邊慢慢加 SAS 到樣品溶液中，使濃度為 0.5:1 (v/v) ； 2.將溶液放在磁力攪拌器上攪拌 6 小時 或過夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 離心 30 min （ 4 ° C ），保留上清液；上清液再加 SAS 到 0.5:1(v/v) ，再次離心得到沉澱。將沉澱溶於 PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 (v/v) ，再次離心得到沉澱。將沉澱溶於 PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 5.雜蛋白與欲純化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差別很大時，用預沉澱除雜蛋白是非常有效
（二）為避免體積過大，可用固體硫酸氨進行鹽析（硫酸氨用量參考表 1 ）；硫酸氨沉澱法與層析 技術結合使用，可得到更進一步純化的抗體。
- 詞條統計
-
- 瀏覽次數：次
- 編輯次數：10次歷史版本
- 最近更新： 云靖吖