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熱啓動PCR
鎖定
熱啓動PCR（hot start PCR）是指使Taq DNA 聚合酶只有在樣品温度至少超過70℃時才發揮作用的PCR，可提高反應的特異性。Taq DNA 聚合酶通常在比適宜温度低得多的條件下仍有較強的活性。PCR 反應的最初加熱過程中，樣品温度上升到70℃之前，在較低的温度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結合，並在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。結果會導致非靶序列的擴增，影響反應的特異性。熱啓動可減少非靶序列的擴增，提高反應的特異性。在引物設計時如果某位點因為遺傳元件的定位而受限，如site-directed 突變、表達克隆或用於DNA 工程的遺傳元件的構建和操作等情況，熱啓動PCR 尤為有效。
- 中文名
- 熱啓動PCR
- 外文名
- hot start PCR
- 應用學科
- 分子生物學
基本概念
熱啓動通過抑制一種基本成分延遲DNA合成，直到PCR 儀達到變性温度。延緩加入Taq DNA 聚合酶的手工熱啓動方法十分煩瑣，尤其是對高通量應用。其他熱啓動方法使用蠟防護層將一種基本成分(鎂離子、酶、模板、緩衝液等) 隔離開。在熱循環時，蠟熔化把各種成分釋放出來並混在一起。蠟防護層法同樣比較煩瑣，易於污染，不適用於高通量應用。
