活性磷酸鹽

磷在水中幾乎只以磷酸鹽的形式存在。磷酸鹽可以溶解，吸附在顆粒物上，或是存在於水生生物體內。磷酸鹽可能以最簡單的正磷酸鹽（PO₄^3-）形態存在，也可能以分子量更大的形態存在，例如縮合磷酸鹽和有機磷酸鹽。

正磷酸鹽常被稱為活性磷酸鹽，因為只有這種磷酸鹽會和比色法測定磷酸鹽的試驗中所用的試劑直接發生反應。這種類型的磷酸鹽被植物、細菌和藻類所利用，被認為是湖泊等地表水體中的一種限制性營養鹽。化肥含有正磷酸鹽，並可能隨着農業用地的徑流進入水體，使水體中含有大量磷元素。 ^[1] 

水樣中的活性磷酸鹽採用磷鉬藍法測定。活性磷酸鹽在一定的酸性條件下可與鉬酸銨作用，生成淡黃色的磷鉬酸銨，但磷鉬酸銨髮色能力弱，在通常的磷濃度下顯不出黃色來。磷鉬酸銨可被還原劑抗壞血酸還原成髮色能力很強的藍色化合物——“鉬藍”，還原後的溶液在690nm處有較大吸收，可用比色法分析。 ^[2] 

1．分光光度計及配套比色皿

2．具塞比色管

3．容量瓶、移液管等常規實驗室設備

1．硫酸溶液（1:2）：在不斷攪拌下將濃硫酸緩緩倒入同體積蒸餾水中，冷卻後盛於試劑瓶中。

2．酒石酸銻鉀：溶解6g酒石酸銻鉀於200ml水中，貯於聚乙烯瓶中，溶液變混濁時，應重配。

3．鉬酸銨溶液（10%）：稱取5g鉬酸銨固體[(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O]，溶解後稀釋至50ml，若溶液渾濁應取其澄清液貯於聚乙烯瓶中。

4．鉬酸銨—硫酸混合試劑：45ml鉬酸銨溶液與200ml硫酸溶液混合，加入5ml酒石酸銻鉀溶液，混勻後貯於聚乙烯瓶中，此溶液避光保存可穩定數日，如發現混濁須重新配製。

5．抗壞血酸溶液：溶解20g抗壞血酸（C₆H₈O₆）於200mL水中，盛於棕色試劑瓶中。此溶液4℃避光保存，可穩定1個月。

6．磷標準貯備液（0.2mg PO₄^3--P/mL）：稱取KH₂PO₄（AR，於115℃下烘1h）0.8790g溶於蒸餾水中，並轉入1000ml容量瓶中定容。

7．磷標準使用液（2ug PO₄^3--P/mL）：移取1.0ml標準貯備液於100ml容量瓶中定容。

1．繪製工作曲線

①取6個25ml具塞比色管，分別加入0、0.50、1.00、1.50、2.00、2..50ml磷標準使用液，加水至標線，混勻。

②分別加入鉬酸銨—硫酸混合試劑1ml，混勻後放置3min；再分別加入抗壞血酸溶液1ml，混勻後顯色10min。

③用分光光度計在690nm波長處，於比色皿中對照蒸餾水測定上述溶液的吸光度E值（其中試劑空白吸光度為E₀）。

④在座標紙上，以吸光度E-E₀為縱座標，磷濃度為橫座標作圖，得工作曲線。

2．水樣的測定（雙樣測定，取平均值）

① 取25ml水樣於比色管中。

② 參照標準曲線繪製過程中的步驟②、③，顯色並測定該水樣的吸光度值E_w。

由水樣的測定值E_w-E₀查工作曲線，得該水樣中活性磷酸鹽的含量。

1．顯色後須在30min之內測定溶液的吸光度值，30min之後溶液的顏色將逐漸減退。

2．水樣的含鹽量對磷鉬藍的顯色有影響。對於海水樣品，上述從工作曲線上查得的數值尚需乘以適當的校正係數Ks，才能獲得海水樣品中活性磷酸鹽磷的實際濃度。

3．由於磷鉬藍的摩爾吸光係數較小，比色時採用液層厚度較大的比色皿可提高測定的精確度。