斜面培養基

與斜面培養基相對和並列的概念是：平面培養基、高層培養基。固體培養基倒在培養皿內，凝固成平面的稱為平板培養基，用於菌種分離及研究菌類的某些特性；分裝在試管內，直立凝固而製成的稱為高層培養基，這樣接入菌種後雖然發育的面小了一點，但培養基的厚度增大，營養豐富，時間長些也不容易乾燥、開裂，常用於保存菌種。

向容器內加入所需水量的一部分，按照培養基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最後補足所需水分。對蛋白腖、肉膏等物質，需加熱溶解，加熱過程所蒸發的水分，應在全部原料溶解後加水補足。

配製固體培養基時，先將上述已配好的液體培養基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續加熱至完全融化。並不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。

用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節，直到調節到配方要求的pH值為止。

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時，最好摺疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙摺疊成瓦稜形，鋪在漏斗上過濾。

已過濾的培養基應進行分裝。如果要製作斜面培養基，須將培養基分裝於試管中。如果要製作平板培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝於錐形瓶內。

分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養基流出，另一隻手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養基。分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。

裝入試管的培養基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般製作斜面培養基時，每隻15×150毫米的試管，約裝3～4毫升（1/4～1/3試管高度），如製作深層培養基，每隻20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每隻錐形瓶裝入的培養基，一般以其容積的一半為宜。

分裝完畢後，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應採用普通新鮮、乾燥的棉花製作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞無法使用。製作棉塞時，要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時左手食指與拇指稍稍緊握，就會形成1個長棒形的棉塞。棉塞作成後，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼內壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺摺侵入。棉塞不要過緊過鬆，塞好後，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內，上端露出少許棉花便於拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，準備滅菌。

培養基滅菌後，如製作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。

(1)製作斜面培養基。在實驗台上放1支長0.5～1米左右的木條，厚度為1釐米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內培養基自然傾斜，凝固後即成斜面培養基。

(2)製作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗台上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養皿蓋，右手迅速將培養基倒入培養皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。鋪放培養基後放置15分鐘左右，待培養基凝固後，再5個培養皿一疊，倒置過來，平放在恆温箱裏，24小時後檢查，如培養基末長雜菌，即可用來培養微生物。

有一種簡捷快速製備斜面培養基的方法，現介紹如下：

製作培養基斜面，傳統的方法是將試管每10支為一組紮成一捆，高壓滅菌後，一支一支地擺成斜面，操作比較煩瑣，佔用面積又多，造成諸多不便。

1、將膠合板截成長18釐米(與試管長度相等或略短)、寬9釐米(比並排5支試管直徑的總和略窄)的小塊備用。

2、在並排5支試管上面平置截好的膠合板，再在膠合板上面並排放5支試管，然後將試管的上、下端分別用牛皮紙包好，用線紮緊，使膠合板兩側的試管保持平行，置高壓鍋中滅菌。

3、高壓滅菌後，經自然冷卻，待氣壓降至零時，將高壓鍋的鍋蓋打開點，當棉塞水分充分蒸發後取出，不用拆捆，直接擺成斜面。大量制斜面時，既快捷又很少佔用空間，非常方便，還便於保温，減緩凝結速度，充分吸收遊離水分。

4、如需將斜面培養基保存一段時間，可在滅菌前將聚丙烯塑料袋套在試管外並紮緊袋口，滅菌後取出，直接擺成斜面，可防止水分蒸發。

(1)試管棉塞鬆緊要適度，不宜太鬆或太緊，棉塞深入試管內約 3cm 左右，並在表壓0.5MPa(1.5kg/cm2)下滅菌 1.5h，烘乾備用。

(2)將瓊脂按配比量稱取，剪成細小段，用蒸餾水浸泡乾淨，紗布過濾瀝乾，置於燒杯中加適量蒸餾水，放在沸水鍋中煮沸溶解。

(3)配製培養基時，磷鹽、鎂鹽必須分別溶解，防止產生複合鹽沉澱，降低有效成份。(4)用氫氧化鈉溶液調至 pH7.0~7.2，不能偏酸或過鹼，否則不利於菌種生長。(5)根據試管大小規格，一般裝入培養基量為試管體積的 1/4 左右。 每支試管棉塞部分

最好用紙包紮。

(6)斜面培養基在 120°C滅菌 30min，不能使滅菌温度太低或太高，前者滅菌不徹底，後

者培養基破壞嚴重，不利於菌種生長。

(7)斜面培養基滅菌後，取出冷卻至 45°C左右攤成斜面。 待冷卻凝固後移於 37°C温度下

空白培養 48h，經仔細檢查確無雜菌後包紮備用(黴季可放冰箱保存) ^[1]