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整合型載體
鎖定
整合型載體有pPIC3、pPIC9、pHIL-D1、pA0804、pA0815、pPSC3K等。
- 中文名
- 整合型載體
- 外文名
- integrating vector
- 拼 音
- zhěng hé xíng zǎi tǐ
- 類 型
- 生物學
整合型載體分類介紹
有pPIC3、pPIC9、pHIL-D1、pA0804、pA0815、pPSC3K等。典型的巴斯德畢赤酵母表達載體載體包含醇氧化酶—1(AOX1)基因的啓動子和轉錄終止子(5'AOX1和3'AOX1),它們被多克隆位點(MCS)分開,外源基因可以在此插入。此載體還包含組氨醇脱氫酶基因(HIS4)選擇標記及3'AOX1區。當整合型載體轉化受體時,它的5'AOX1和3'AOX1能與染色體上的同源基因重組,從而使整個載體連同外源基因插入到受體染色體上,外源基因在5'AOX1啓動子控制下表達。
整合型載體轉化基因
經同一表達載體轉化後分離得到的不同轉化子,其產物的表達水平不同。即使受體染色體上重組了相同數目的表達盒。轉化子的表達情況也不近相同。因此,為了獲得高產量的表達菌株,需要對大量的轉化子進行篩選。小量搖瓶培養無疑是篩選轉化子簡便而有效的方法。但是由於在搖瓶培養中巴斯德畢赤酵母表達外源蛋白的水平往往不能準確地反映罐發酵中的表達情況,使之成為令人頭痛的問題。主要原因是在搖瓶培養中,培養液的pH值無法控制,培養物通氣不充分及無法控制添加碳源的最適速率。但是為了避免對每一個表達菌株進行繁瑣的發酵罐培養條件的實驗,仍需摸索表達菌株的搖瓶培養條件,使其產物的表達量與預期的發酵罐培養結果相近。
整合型載體培養條件
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