放射免疫

利用同位素標記的與未標記的抗原同抗體發生競爭性抑制反應的放射性同位素體外微量分析方法。又稱競爭性飽和分析法。1960年美國化學家R.S.耶洛和S.A.貝爾森提出此法，耶洛因此於1977年獲得諾貝爾生理學或醫學獎。

耶洛1921年生於紐約。父母都是猶太人，她從小酷愛自然科學。在大學裏，她熱衷於物理學，卻致力於醫學研究，她工作於紐約市布隆克斯區退伍軍人醫院，致力於「勝太荷爾蒙的放射免疫分析」。居里夫人自傳和核子物理學家美籍意大利人費米的講演，對她後來的事業產生了很大的影響。她渴望從事科學研究工作。然而，當時的美國，哪個大學也不同意將一筆物理學獎金給一個女人。她主動給一位傑出的化學家當非全日制秘書。由於工作出色，幾個月後，伊利諾依大學給了她一份獎學金，並給了她一個助理研究員的位置。從1941年到1945年，她把主要精力都用在三項活動上：教學、鑽研高深課題和準備核物理博士論文。她於1945年獲得博士學位。從1945年起，她邊授課，邊研究，邊著書立説，並在勃隆克斯醫院籌備和開發新的放射性同位素應用工作。

早在得獎的二十多年，耶洛便在一個偶然的機會里，發現豬胰臟的胰島素可用來治療糖尿病，可以使病人產生抗體。這種發現與當時的治療理論不太合適。因為治療藥物能引起抗體是不可思議的事，因此其發現並不為當時的人所接受。然而，這個發現卻引導近代內分泌學的研究進入了新的境界，更由此而推展，使得已往不易測定的身體中的物質得以測定。這個方法就是放射免疫測定法，又叫放射免疫測定法（radioimmunoassav，簡稱RIA）。80年代初，應用此法測定的生物活性物質已達300種以上。

使放射性標記抗原和未標記抗原（待測物）與不足量的特異性抗體競爭性地結合，反應後分離並測量放射性而求得未標記抗原的量。*Ag為同位素標記的抗原,與未標記的抗原Ag有相同的免疫活性，兩者以競爭性的方式與抗體Ab結合，形成*Ag-Ab或Ag-Ab複合物,在一定反應時間後達到動態平衡。如果反應系統內加入的*Ag和Ab的量是恆定的,且*Ag和Ag的總和大於Ab有效結合點時,則*Ag-Ab生成量受Ag量的限制。Ag增多時，Ag-Ab生成量也增多，而*Ag-Ab生成量則相對地減少,同時遊離*Ag也增多。因此,*Ag-Ab與Ag的含量呈一定的函數關係。如採用一種有效的分離方法，將*Ag-Ab和Ag-Ab複合物 (以 B表示)與*Ag、Ag(以F表示)分離,並測定B和F的放射性,可有以下規律:如樣品中Ag增多，則B的放射性降低，F的放射性增高，即Ag與B成反比。計算B/F或B/T值 (T=B+F),即可算出樣品中Ag的含量。由於 RIA是以放射性標記與非標記抗原競爭性地與抗體結合為理論基礎，故又稱為競爭性放射飽和分析法。

分別在一定數量的試管中加入不同濃度的標準抗原（或未知樣品），每管加入等量的放射性標記抗原和一定量的抗體，在4℃或37℃下保温,待反應平衡後,選用適當的方法將B和F分離，測量放

射性強度,由放射性強度比B/T對Ag量製出標準曲線,即可從標準曲線上查出未知樣品量。

測定時，首先要製備出純的抗原和抗體。凡能刺激機體產生抗體，且與抗體發生特異性結合反應的物質通稱為抗原，例如蛋白質(細菌、病毒、異種血清等)。只有反應原性而無免疫原性的物質稱為不完全抗原或半抗原，如多糖、類脂和一些小分子物質。可用化學方法把一些半抗原與載體（蛋白質的大分子）結合而獲得免疫原性,這種結合為RIA 開闢了廣泛的應用範圍。常用的載體有γ球蛋白、纖維蛋白質、雞卵蛋白、血藍蛋白和各種甲狀腺球蛋白。半抗原結合載體是由半抗原的功能基團與載體功能基團所決定，一般連接後不應引起半抗原結構改變，也不使載體蛋白變性。常用結合載體的方法有混合酸鹼法、水溶性的羰二亞胺法等。

抗體是能與相應抗原或半抗原專一地結合的免疫球蛋白分子。應用免疫技術可以獲得特異性的抗體。抗體的敏感度範圍由其特異性和親和力決定，測定時所用的抗體稀釋度越低，則加入的量越多，測定的敏感度越低，可測範圍越寬。如加入抗體量少，則測定的敏感度提高，可測範圍變窄。一般在選定標記抗原用量後，即可根據測定要求來選擇合適的抗血清用量。

常用於標記抗原的放射性同位素有3H、125I、131I 等，3H可以置換有機化合物中的氫，且不影響原有化學性質。3H半衰期長，能量低，便於防護，常用的標記化合物有3H環磷酸鳥苷、3H環磷酸腺苷、3H睾丸酮等。125I 和131I原子的化學性質比較活潑,標記方法簡便,不論多肽、蛋白質或小分子半抗原均可進行碘標記。有些半抗原不能直接用碘標記, 常常接上一個酪氨酸再以碘標記,以減少標記抗原免疫化學活性的損失。常用的偶聯試劑有：碳化二亞胺類、異?唑鹽類、烷基氯甲酸酯類、二異氰酸鹽類及亞氨酸酯等。

此法用於在內分泌學中測定胰島素、生長激素、甲狀旁腺激素、血管緊張素、催乳素、黃體化激素、促卵泡成熟激素、前列腺素等，以鑑別、診斷、研究激素的生理和藥理作用，目前較多用於研究激素與受體結合的機理。在傳染病學方面廣泛用於乙型肝炎抗原的亞型分類測定。在臨牀免疫學上測定免疫球蛋白 G、免疫球蛋白E及抗脱氧核糖核酸抗體;進一步的應用包括甲狀腺球蛋白抗體、類風濕。

因子、補體及抗食物抗原抗體的測定。在腫瘤學方面用於測定癌胚抗原、血纖維蛋白溶酶原、葉酸、維生素B12以及血纖維蛋白原和血纖維蛋白降解產物。根據已建立的人絨毛膜促性腺激素、癌胚抗原和甲胎蛋白的RIA結果,為有效地初篩和在手術後追蹤釋放這些蛋白質的腫瘤提供了參考依據。在藥理學方面可測定嗎啡、氯丙嗪、苯妥英鈉、慶大黴素、地高辛、茶鹼等，是檢測藥物中毒和藥物代謝的一個比較迅速和簡便的方法。

RIA法的優點是靈敏、特異、簡便易行、用樣量少等，常可測至皮摩爾。本法雖然也用放射性物質，但一般都是在測試樣品時再加入標記的同位素示蹤物，此示蹤物的放射性強度極低，一般不會對實驗者引起輻射損傷。本法的缺點是有時會出現交叉反應、假陽性反應，組織樣品處理不夠迅速，不能滅活降解酶和鹽及pH有時會影響結果等。

在本法的基礎上，近年來又發展了其他免疫分析法，用其他有特殊性質的物質代替放射性同位素來標記抗原，同樣利用標記與未標記抗原與抗體的競爭性結合，然後用適宜方法測定。其中研究較多的是熒光免疫分析，採用熒光化合物標記抗原，結合分離後通過熒光值的測定進行定量分析。

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附件：

與我們合作北京市各大醫院及院校

友誼醫院、北京中日友好醫院、北京西苑醫院、安貞醫院、廣安門醫院、北京天壇醫院、北京宣武醫院、北京復興醫院、北京大學第三醫院、同仁醫院、北京軍區總醫院、第二炮兵總院、清華大學醫學院、北京中醫藥大學東方醫、東直門醫院、中國中醫科學院中藥研究所、中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所、中國中醫科學院醫學實驗中心、中國農業科學院草原研究所、北京市神經外科研究所、中國中醫科學院針灸所、國家體育總局運動醫學研究所、中醫科學院針灸所、中國農科院飼料所、中國科學院植物研究所、中國科學院藥物研究所、中國中醫針灸所、首都醫科大學生理教研室、清華大學、中國農業大學、北京體育大學、北京大學醫學部藥學院、北京中醫藥大學、北京師範大學、首都體育學院、北京中醫藥大學中藥學院、北京農學院、北京中醫藥大學基礎學院

外省市醫院：

華北煤炭醫學院附屬醫院、蘇州大學附屬第一醫院、江西省萍鄉市人民醫院、蘭州軍區總醫院、廣州市中醫醫院、深圳兒童醫院、海口市人民醫院、天津醫大代謝醫院、蘇州大學附屬第一醫院、山東省立醫院、西藏軍區總醫院、武漢大學中南醫院、昆明醫學院、温州醫學院附屬第一醫院、南通大學附屬醫院、重慶市沙坪壩西南醫院、重慶市急救醫療中心、湖南湘雅醫院、佛山市中醫院、內蒙古醫學院、紹興市人民醫院、甘肅中醫學院、武漢大學中南醫院、安徽醫科大學附屬第二醫院、南京兒童醫院、哈爾濱醫科大學第一臨牀醫院、汕頭大學醫學院第一附屬醫院、內蒙古通遼市醫院、廣西右江民族醫學院附屬醫院、黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院、徐州醫學院附屬醫院、汕頭醫學院第一附屬醫院、蘭州軍區蘭州總醫院、濱州醫學院附屬醫院、解放軍第一七五醫院、廣州珠江醫院、河南省人民醫院、安徽蚌埠醫學院第一附屬醫院、江蘇省中醫院-藥理實驗室、江蘇省中醫院-藥理實驗室

外省市大學、學院及科研單位：

南京中醫藥大學、南京農業大學、廣東省暨南大學、瀋陽農業大學、江蘇省東南大學、內蒙古農業大學、浙江中醫藥大學、新疆石河子大學、新疆農業大學、復旦大學、山東農業大學、四川農業大學、河北農業大學、河北醫科大學、瀋陽農業大學、華中農業大學、天津中醫藥大學、廣州中醫藥大學、成都中醫藥大學、湖南中醫藥大學、黑龍江中醫藥大學、黑龍江醫科大、上海市第二軍醫大學、西安第四軍醫大學、江蘇大學、佳木斯大學、湖北大學、雲南師範大學、山西農業大學、山西醫科大學、重慶醫科大學、遼寧中醫藥大學、湖南農業大學動科院、內蒙古農業大學動物科學學院、南京農業大學動物醫學院、黑龍江中醫藥大學中醫藥研究院、武漢工業學院湖北省動物科學與營養工程學院、福建農林大學動物科學學院、徐蘇州大學醫學院、州醫學院、安徽中醫學院、江西中醫學院、温州醫學院、江南大學食品學院、河北農業大學中獸醫學院、福建農林大學動物科學院、內蒙古農業大學動物科學與醫學學院、貴陽醫學院、四川農大動物醫學院、石河子大學醫學院、雲南師範大學生命科學院、武漢工業學院、江西省農科院、江西南昌大學食品科學與技術國家重點實驗室、江蘇康緣藥業藥理所、蘇州大學圍產醫學教研室、內蒙古地方病防治研究中心、浙江中醫院大學藥物研究所、浙江農科院畜牧所、杭州浙醫心研所、武漢工業學院飼料科學系、重慶市畜牧科學院家禽所、四川體院

檢測內容:

近半年研究所合作單位的主要檢測內容，粗略統計為300多項：其中

1.北京天壇醫院、北京市神經外科研究所：腦源性神經營養因子BDNF、神經營養因子-3（NT-3）、血管細胞間粘附因子VCAM-1、細胞間粘附因子ICAM-1、神經生長因子NGF、前列腺素PGE2、血管內皮生長因子VEGF。

2.北京大學醫學部：BMP2、胰島素INS、血脂四項：HDL、LDL、TG、TC；BUN、甲狀旁腺素PTH、exendin-4。

3.北京中醫藥大學：大鼠血清測定，神經激肽A（NKA）、血管活性腸肽VIP、促血小板生成素TPO、促紅細胞生成素EPO、血管內皮生長因子VEGF、降鈣素基因相關多肽CGRP、白介素系列：IL-1IL-6；6-酮、TXB2、磷脂酶A2、促腎上腺皮質激素ACTH、B-內啡肽等；常規生化檢測、抗氧化指標檢測:如：SOD、MDA、NO、NOS、GSH-PX、CAT、T-AOC、XOD、ATP酶、脂肪酶、谷氨酰轉移酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、單胺氧化酶A、單胺氧化酶B；酶免檢測：巨噬細胞炎性蛋白la、組織因子TF、纖維連接蛋白FN、血清凋亡因子sfasl/sfas、血清同型半胱氨酸HCY、白三烯、羥基壬烯酸HNE。

4.北京友誼醫院：廋素、脂聯素

5.北京復興醫院:腦鈉素、紅細胞生成素

6.內蒙古農業大學：雞血清檢測抗氧化指標如：SOD、MDA、NO、NOS、IGG/IGA/IGM、遊離脂肪酸等；酶免檢測：CD4、CD3、CD8、活性維生素D3、一型膠原氨基酸前肽；放免檢測如，甲狀腺系列PTH、胰島素生長因子、白介素系列、降鈣素、促腎上腺皮質激素、生長激素、骨橋蛋白、骨保護素、生長素ghrelin、SS、瘦素、促性腺激素釋放激素GNRH等。

7.北京體育大學：人血漿檢測生化指標HDL、LDL、TG、TC、BUN;放免法測定E2、ET-1、ANP、INS、AI；皮質醇、血管緊張素II、腎上腺素(ADR)、去甲腎上腺素(NOR)、抗利尿激素AVP。

8.首都醫科大學：大鼠血清檢測多巴胺DA、環磷酸腺苷、環磷酸鳥苷、生長抑素、血管活性腸肽、極低密度脂蛋白OXLDL、內皮素、血管內皮生長因子VEGF、腦鈉素BNP。

9.南京農業大學：鴨組織測定白介素-1、白介素-6、豬血清測定，促性腺激素釋放激素GNRH、促黃體生成激素LH。

10.瀋陽農業大學：小鼠血清檢測；胰島素INS、促甲狀腺素TSH、促性腺激素T、LH等。

11.南京中醫藥大學：大鼠血清檢測；IL-1、IL-6、；酶免檢測：CD4、CD8、P選擇素CD62P。

12.浙江中醫藥大學：大鼠血漿測定，T、E2、TXB2、6-酮、AI、AII、ALD、CGRP、ANP、CAMP、CGMP。

13.黑龍江中醫藥大學：大鼠腦組織測定IL-1、IL-6、PGE2、環磷酸腺苷、環磷酸鳥苷。

15.湖南中醫藥大學：人血清測定胃泌素、前列腺素PGE2、IL-1、IL-10、TNF、抗氧化指標如：SOD、MDA。

16.武漢工業學院：豬血漿測定：瘦素、C-反應蛋白、白介素-15、脂聯素、抵抗素。

17.上海市第二軍醫大學：大鼠細胞培養液測定皮質酮、孕酮、雌二醇、環磷酸腺苷。

18.中國中醫科學院：大鼠血清檢測；IL-2、IL-5、IL-10、r-干擾素、免疫球蛋白IGG/A/M、胃動素、胃泌素、胃動素受體、胃泌素受體。

20.中國農業科學院：雞血清檢測胰島素、瘦素、脂聯素、抵抗素、極低密度脂蛋白OXLDL。

21.蘇州大學醫學院：羊血漿測定抗氧化指標SOD、MDA、NO、NOS；放免檢測如：血管緊張素轉化酶ACE、AI、AII、ALD、INS、AVP、ET-1、PGE2、TXB2、LEP、催產素OT、IGF-2、AFP等。

22.安貞醫院：人血漿測定皮質醇、血管緊張素II、腎上腺素(ADR)、去甲腎上腺素(NOR)。

23.中國中醫科學院西苑醫院：小鼠測定環磷酸腺苷、環磷酸鳥苷、白介素-6、內皮素、抗氧化指標檢測:如：SOD、MDA、NO。

24.中國中醫科學院廣安門醫院：人血漿測定，6-酮、TXB2、ET-1、AII。

25.福建農林大學：豬血清測定T3、T4、TSH、GH、TNF、PRL等。

26.內蒙古草原研究所：大鼠血清放免法測定，睾酮、孕酮、雌二醇、雌三醇、皮質酮、促黃體生成素、促濾泡成熟激素、促性腺激素釋放激素、醛固酮、褪黑素、前列腺素E2、生長激素、腫瘤壞死因子、促絨毛膜性腺激素、促腎上腺素釋放激素；酶免法檢測：雙氫睾酮DHT、雌酮E1、甲羥孕酮MPA、雄烯二酮ASD、FSH受體、LH受體。

27.蘇州大學附屬第一醫院：人血清測定促紅細胞生成素EPO、葉酸、維生素B12。

28.蘭州大學第一醫院：大鼠血清檢測；胰高血糖樣多肽GIP-1、可溶性內皮細胞蛋白C受體、胰島素、消脂素、胃泌素、抗氧化指標檢測:如：SOD、MDA、NO、血脂、遊離脂肪酸。

29.江西南昌大學醫學院：兔血清檢測性腺激素如:FSH、E2、P、PRL、T、LH。

30.哈爾濱醫科大學：人血清測定褪黑素。

31.新疆石河子大學：人血清測定胰島素生長因子-1、胰島素生長因子-2。

32.深圳兒童醫院：人唾液測定表皮生長因子EGF。

33.宣武醫院：人血清測定白介素-6、白介素-10、腫瘤壞死因子TNF.。

34.廣州市中醫醫院：人血漿測定，胃動素、胃泌素、生長抑素、瘦素、酪酪肽、血管活性腸肽。

35.中國中醫科學院基礎醫學研究所：大鼠血漿測定P物質、組胺、鈣離子。

36.中日友好醫院:大鼠血清檢測生化指標；ALT、AST、ALP、r-谷氨醯胺、總膽紅素、直接膽紅素。

37.廣安門醫院:FSH、LH、PRL、T、IL-1B、TGF-B1、ET-1、AII、TXB2、纖維連接蛋白(FN)、I型膠原、轉化生長因子-B1(TGF-B1)、整合素連接激酶-1(ILK-1)、結締組織生長因子(CTGF)、肝細胞生長因子(HGF)、骨形成蛋白-7（BMP-7)、IL-8、瘦素、分泌型IgA、CD4、CD8、NK細胞活性、IGG、IGA、IL-2、IFN-γ、sandwich酶免法。

38.東方醫院前列腺素E2、胃泌素GAS、表皮生長因子EGF、胃蛋白酶原II、SOD、MDA;

39.西苑醫院白細胞介素-1、白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α、心肌鈣蛋白、肌酸激酶同工酶、環磷酸腺苷CAMP、環磷酸鳥苷CGMP、超氧化物歧化酶SOD、丙二醛MDA、腫瘤壞死因子TNF-α、C-反應蛋白、一氧化氮、血栓素、6-酮、內皮素;

40.海軍總醫院β-內啡肽、五羥色胺、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛、一氧化氮合成酶;

41.北方交通大學：T3、T4、ACTH、CORT等

42.新疆農業大學：綿羊血清檢測抗利尿激素AVP、醛固酮、腎素、促腎上腺皮質激素、皮質酮、性腺激素測定如：HCG、E2、P、E3、FSH、LH；微量元素鈣、鐵、銅、鋅、鎂。

43.中國農業大學：羊血清測生化指標BUN、TC、TG、ALB、TOC、IGA/G/M、等；牛血清抗氧化指標檢測:如：SOD、MDA、NO、NOS、GSH-PX、CAT、胰蛋白酶、脂肪酶、糜蛋白酶、澱粉酶、乳糖酶等；放免檢測如r-干擾素、皮質酮、醛固酮、生長激素、褪黑素、垂體泌乳素等；酶免檢測：腎上腺素(ADR)、去甲腎上腺素(NOR)、轉化生長因子TGF-B2、甲狀腺過氧化物酶TPO、脱碘酶、極低密度脂蛋白OXLDL；雞蛋中測定粗脂肪、甘油三酯、總膽固醇的含量。

44.解放軍總醫院等IL-4、γ-干擾素。

45、北京軍區總醫院中介素。