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巰基
鎖定
性質:具有臭味,弱酸性、易被氧化。形成氫鍵能力比羥基低,但脂溶性高於羥基
- 中文名
- 巰基
- 外文名
- sulfhydryl group
- 別 名
- 氫硫基;硫醇基
- 化學式
- -SH
- 性 質
- 具有臭味,弱酸性、易被氧化
目錄
- 1 巰基與二硫鍵的相互轉化
- 2 檢測方法
巰基巰基與二硫鍵的相互轉化
在體內自然狀態下,二硫鍵與巰基的相互轉化主要是通過巰基/二硫鍵氧化還原酶的催化而實現的 。天然二硫鍵的形成是許多蛋白正確摺疊中的限速步驟,在穩定蛋白質構象和保持蛋白質活性方面起重要作用。在體外人工環境下,從氨基酸水平來看,半胱氨酸在鹼性溶液中易被氧化形成二硫鍵,生成胱氨酸。氧化和還原劑均可打開二硫鍵。在研究蛋白質結構時,氧化劑過甲酸可定量拆開二硫鍵,生成相應磺酸。還原劑如巰基乙醇 、巰基乙酸也能拆開二硫鍵,生成相應巰基化合物。由於半胱氨酸中巰基很不穩定,極易氧化,因此利用還原劑拆開二硫鍵時,往往進一步用碘乙酰胺、氯化苄、N-乙基丁烯二亞酰胺和對氯汞苯甲酸等試劑與巰基作用,將其保護起來,防止其重新氧化。
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巰基檢測方法
1、RP-HPLC法測定巰基含量
採用色譜柱Kromasil-C18 (250×4.6mm,5μm),流動相A(0.1%TFA)和流動相B(甲醇)梯度洗脱:流動相B 40%~80%,0~10min,然後80% B保持5min,流速0.8mL/min,檢測波長327nm,得到NTB標準曲線y=3.67059x+0.14123,回收率101.9%,RSD=1.17%,從而建立了一種高靈敏度巰基檢測方法。
2、採用分子熒光光譜法作為反應條件,用反相高效液相色譜梯度洗脱法測定巰基
用OPA、丹酰氯、茚三酮與半胱氨酸反應,測其可見紫外吸收光譜及熒光光譜;在不同pH、温度、反應時間條件下,用OPA與半胱氨酸反應測其熒光度;分別吸收0.1mmol/L半胱氨酸溶液0、20、40、60、80、100 μL,各加入10 μL H2O2,室温下反應30min,然後加熱蒸乾,殘渣用200μL OPA衍生液,定容至5mL,4 min時測其熒光光譜。取pH=8.4的硼酸緩衝溶液5μL,混合10次;加入OPA衍生液2μL,混合進樣走HPLC。梯度條件:洗脱液B所佔比例0min為0,17min線性增加至60%,17.5min線性增加至100%,20min洗脱結束。激發波長為340nm,熒光檢測波長為450nm。
3、柱前衍生高效液相色譜-紫外檢測法
以三(2-羧乙基)膦為還原劑,SBD-F為衍生劑,N-乙酰半胱氨酸為內標,C8色譜柱分離,流動相為甲醇 -磷酸鹽緩衝液(pH =3.0),梯度洗脱,385nm處檢測。線性範圍為8.3~1042.6 μmol/L,最低檢測限為 0.42μmol/L,日間精密度為1.67%~1.86%,日間精密度為 2.08%~3.06 %,平均回收率為98.1%~103.2%。
4.、電化學脱附與熒光技術聯用
將樣品固定在烷基硫醇自組裝膜修飾的金電極表面,通過熒光試劑馬來酰亞胺與遊離巰基反應原位標記GSH,恆電位條件下脱附電極表面吸附物,檢測脱附物在0.1 mol·L KOH溶液中的熒光強度。
5、拉曼光譜法