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差速離心
鎖定
- 中文名
- 差速離心
- 外文名
- differential centrifugation
差速離心基本原理
物體圍繞中心軸旋轉時會受到離心力F的作用。當物體的質量為 M、體積為V、密度為D、旋轉半徑為r、角速度為(弧度數/秒)時,可得: F=Mω2r 或者 F=V.D.ω2r (1) 上述表明:被離心物質所受到的離心力與該物質的質量、體積、密度、離心角速度以及旋轉半徑呈正比關係。離心力越大,被離心物質沉降得越快。 在離心過程中,被離心物質還要克服浮力和摩擦力的阻礙作用。浮力F}和摩擦力F}}分別由下式表示: F’=V.D’.ω2r (2) F’’=f dr/dt (3) 其中D}為溶液密度,f為摩擦係數,dr/dt為沉降速度(單位時間內旋轉半徑的改變)。 在一定條件下,可有 :F=F’+F’’ V.D. ω2r =V.D’ω2r + f. dr/dt dr/dt =Vω2r (D-D’)/f (4) 式(4)表明,沉降速度與被離心物質的體積、密度差呈正比,與f成反比。若以S表示單位力場(ω2r=1)下的沉降速度,則 S=V (D-D’)/f S即為沉降係數。 沉降係數對於生物大分子來説,多數在(1~500)×10-13秒之間。為應用方便起見,人們規定1×10-13秒為一個單位(或稱1S)。一般單純的蛋白質在1~20S之間,較大核酸分 子在4~100S之間,更大的亞細胞結構在30~500S之間。
差速離心以蛋白質為例
溶液中的蛋白質在受到強大的離心作用時,如果蛋白質溶液的密度大於溶劑的密度,蛋白質分子就會下沉,在離心場中,蛋白質分子所受到的淨離心力(離心力減去浮力)與溶劑的摩擦力平衡時,每單位離心場強度定值,這個定值即為沉降係數(sedimentation coefficient)。沉降速度用每單位時間內顆粒下沉的距離來表示。
差速離心測定方法
⑴樣品:蛋白質