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差異顯示
鎖定
是利用一系列的oligo(dT)引物，逆轉錄真核生物細胞中全部表達的mRNA，通過PCR擴增的方法，轉換成cDNA雙鏈，再利用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，將有差異的片段分開，篩選出目的基因。
- 中文名
- 差異顯示
- 技術優勢
- 比較快速
- 領 域
- 基因的鑑定與克隆
- 差異片段
- 差異片段可作為探針
差異顯示技術發展
1992年，梁朋
[1]
和Pardee首次提出差異顯示技術（DD-PCR），並且利用這一技術克隆了幾個基因。由於該技術具有快速、靈敏、簡單和可分析低丰度mRNA的優點，很快成為克隆新基因和研究植物基因表達的有力工具。這項技術最初用於醫學研究上，近年來已開始在高等植物研究中應用，為研究高等植物的發育、生理代謝、基因表達提供了重要的技術手段。
差異顯示技術步驟
從植物組織中提取總RNA
在這個步驟中注意不能有DNA污染，一般用無RNA酶的DNA酶在37℃下處理30min
以Oligo T11MN為引物（M為G、A、C中的任一種，N為A、C、G、T任一種），進行逆轉錄
擴增cDNA的第一條鏈
使差異表達的cDNA片段在6%測序膠上分開
從膠上切割下來，並回收，再進行第二次擴增；
差異片段
差異片段可作為探針；
驗證目的片段，去掉假陽性片段；
從基因組文庫中篩選出相應的全長基因。
技術優勢
差異顯示應用領域
研究激素對植物發育的影響
研究植物發育過程
研究抗病機制
研究次生代謝途徑
研究抗冷機理
- 參考資料
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- 1. 參考資料 ．四川大學生命科學學院
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