外周血單個核細胞

外周血單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞。單個核細胞的體積、形態和比重與外周血其他細胞不同，紅細胞和多核白細胞的比重在1.092左右，單個核細胞的比重為1.075-1.090，血小板為1.030-1.035。因此利用一種介於1.075-1.092之間而近於等滲的溶液作密度梯度離心，使一定密度的細胞按相應密度梯度分佈，可將各種血細胞與單個核細胞分離。 ^[1] 

一、基本原理

外周血單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞，其比重為1.070左右，而紅細胞和多核白細胞的比重超過1.080。這樣利用介於兩者比重之間的溶液(稱為分層液)做密度梯度離心，就可得到單個核細胞。最常用的分層液為聚蔗糖和泛影酸鈉混合比重為1.070±0.001的溶液，國內常用泛影葡胺代替泛影酸鈉。

二、試劑與器材

1、聚蔗糖—泛影葡胺分層液，Hank’s液，RPMI-1640培養液，肝素。

2、水平離心機。

三、操作步驟

1、取外周靜脈血，用肝素抗凝，加等量的Hank’s液並混勻。

2、將分層液加入試管中，用量約為血量的1/2。用吸管沿管壁緩緩將血加入分層液麪上。

3、置於水平離心機離心，1500r/min，10min。可見絕大多數單個核細胞懸浮於血漿和分層液的界面，呈白膜狀。

4、用尖吸管吸取界面的細胞層，置於另一試管中，加入適量的Hank's液，混勻後以1000r/min，離心10min，棄上清。

5、同法洗滌細胞2次。

6、將細胞重懸於RPMI-1640培養液中，4℃保存備用。

四、注意事項

1、在分離外周血單個核細胞過程中，將稀釋血液加於分層液上時，要避免衝散分層液麪，而要使之形成良好的界面，否則影響分離結果。

2、此法操作得當，單個核細胞得率可達80%-90%，影響得率最重要的因素是分層液的比重。 ^[2] 

淋巴細胞來源於造血幹細胞(hemopoietic stem cell，HSC)。造血幹細胞可分化成多能前體細胞( multipotent progenitor cell，MPC)，繼而分化為淋巴樣幹細胞和髓樣幹細胞。淋巴樣幹細胞可繼續發育為成熟的T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞等。骨髓、胸腺造血微環境是造血幹細胞分化發育的主要場所。 ^[3] 

單個核細胞是血液白細胞中具有單個核細胞的一個含糊術語。以淋巴細胞為主，也包括少數單核細胞、漿細胞等。外周血中單個核細胞的相對密度在1.076-1.090之間，常用相對密度1.077±0.001聚蔗糖-泛影葡胺作密度梯度離心加以分離。 ^[4]