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基因擴增方法
鎖定
基因擴增方法是使含有特定基因的DNA片段的拷貝數大量增加的方法。可分為體內和體外兩種情況。在體內可利用質粒作載體,通過重組質粒的大量拷貝使克隆的外源基因得以擴增。添加氯黴素可使某些質粒的含量達到2毫克/升培養液。也可以利用
病毒載體,通過重組病毒在細胞中大量繁殖使基因得以擴增。
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- 中文名
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基因擴增方法
- 分 類
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體內和體外
- 定 義
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使含有特定基因的DNA片段的拷貝數大量增加的方法
在體外是用DNA體外酶學擴散法,該法要求待擴增DNA(靶DNA)區域的兩側順序已知,然後人工合成引物。在含有靶DNA的溶液中加入大量引物,經變性退火後,加入
DNA聚合酶和dNTP進行合成。重複以上步驟,可使靶DNA的數量劇增。此外,還可用該法將
限制性內切酶切點等序列引入。1985年以來在重組DNA技術中得到廣泛應用,但所能合成的片段較短,複製錯誤率比在體內要大。
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- 參考資料
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1.
李慶臻.科學技術方法大辭典:科學出版社,1999