分子生物學實驗技術

《分子生物學實驗技術/國家林業局研究生教育“十三五”規劃教材》共分兩個部分及附錄。*部分側重於分子生物學基本知識及選材的背景知識介紹。第二部分分為兩個方面，一方面為北京林業大學所開綜合實驗內容，並附有實驗線路圖及時間安排；二方面為實驗室開設過的成熟的實驗及目前較為先進的小RNA分離檢測實驗。附錄部分介紹了分子生物學實驗中常用數據、試劑及相關實驗資料。

前言

上篇 實驗基礎知識

第1章 基因工程載體

1．1 質粒載體

1．2 噬菌體載體

1．3 柯斯質粒載體

第2章 基因操作的工具酶

2．1 限制性內切酶

2．2 DNA連接酶及其應用

2．3 DNA聚合酶

2．4 逆轉錄酶（反轉錄酶）

2．5 修飾性工具酶

下篇 綜合實驗

實驗一 pEGFP—N1質粒DNA的提取、鑑定及濃度測定

實驗二 聚合酶鏈式反應（PcR）技術體外擴增EGFP基因

實驗三 T載體克隆GFP基因

Ⅰ GFP基因片段與載體連接

Ⅱ 大腸桿菌感受態細胞的製備及轉化

實驗四 轉化克隆的篩選和鑑定

實驗五 外源GFP基因原核表達

實驗六 Southern印跡雜交

實驗七 SDS一PAGE檢測綠色熒光蛋白的原核表達

實驗八 綠色熒光蛋白（GFP）的免疫印跡

實驗九 植物基因組DNA的提取及含量、純度檢測

Ⅰ 植物基因組DNA的提取（CTAB法）

Ⅱ 植物DNA純度的鑑定——紫外分光光度計法

Ⅲ 植物DNA相對分子質量的測定——瓊脂糖凝膠電泳法

實驗十 油菜cDNA文庫的構建

Ⅰ 植物組織總RNA的提取及電泳分析

Ⅱ cDNA文庫的構建

實驗十一 小分子RNA的分離純化與鑑定綜合實驗

Ⅰ 小分子RNA分離、純化及修飾

Ⅱ 修飾後小RNA的克隆轉化及測序

Ⅲ 測序結果的生物信息學分析

Ⅳ microRNAs的表達鑑定（Northern blot）

附錄

附錄一 分子生物學實驗中的常用數據及換算關係

附錄二 分子生物學實驗中的常用試劑及溶液、緩衝液

附錄三 與分子生物學實驗相關的實驗資料

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