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凝膠成像系統
鎖定
- 中文名
- 凝膠成像系統
- 概 述
- 凝膠成像即對dna/rna/蛋白質
- 定 義
- 凝膠成像即對dna/rna/蛋白質
- 原 理
- 樣品在電泳凝膠或者其他載體
凝膠成像系統定義
凝膠成像即對dna/rna/蛋白質等凝膠電泳不同染色(如eb、考馬氏亮藍、銀染、sybr green)及微孔板、平皿等非化學發光成像檢測分析。凝膠成像系統可以應用於分子量計算,密度掃描,密度定量, PCR定量等生物工程常規研究。
凝膠成像系統原理
樣品在電泳凝膠或者其他載體上的遷移率不一樣,以標準品或者其他的替代標準品相比較就會對未知樣品作一個定性分析。這個就是圖像分析系統定性的基礎。根據未知樣品在圖譜中的位置可以對其作定性分析,就可以確定它的成份和性質。
樣品對投射或者反射光有部分的吸收,從而照相所得到的圖像上面的樣品條帶的光密度就會有差異。光密度於樣品的濃度或者質量成線性關係。根據未知樣品的光密度,通過於已知濃度的樣品條帶的光密度橫向比較就可以得到未知樣品的濃度或者質量。這就是圖像分析系統定量的基礎。採用最新技術的紫外透射光源和白光透射光源使光的分佈更加均勻,最大限度的消除了光密度不均造成的對結果的影響。
凝膠成像系統應用範圍
(1)分子量定量
(2)密度定量
一般常用的測定DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以後,可以方便的單擊其他未知條帶,根據與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用於對PAGE蛋白膠條帶的濃度測定。
(3)密度掃描
在分子生物學和生物工程研究中,最常用到的是對蛋白表達產物佔整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統的方法是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件結合實驗室常規配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。
(4)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那麼可以利用軟件計算出各個條帶佔總體條帶的相對百分數。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上並不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量並計算其佔總和的百分數,密度掃描時並對選擇區域生成縱向掃描曲線圖並積分。