免疫親和層析

簡單來説，親和層析利用流動相和固定相內不同生物分子之間相互作用強度的差異來分離物質。

通常，在開始親和層析前需要預先進行全細胞提取物的粗製，例如細胞裂解液，生長培養基或血清。

首先將固定相裝入帶有流動相的色譜柱中，其中含有某類特定的生物大分子（從DNA到蛋白質，取決於實驗需求）。等待一段時間使兩相充分混合，隨後將洗滌緩衝液倒入色譜柱中。洗滌緩衝液通過破壞非目標生物分子與固定相的較弱結合來去除非目標生物分子。目標生物分子對固定相具有較高的親和力，因此能夠保持與固定相的結合，而不會被洗滌緩衝液沖走。然後將洗脱緩衝液倒入含有剩餘目標生物分子的色譜柱中。洗脱緩衝液比洗滌緩衝液，能夠從更大程度上減弱靶生物分子與固定相之間的相互作用，從而洗脱靶生物分子。洗脱得到的溶液包含洗脱緩衝液和目標分子，稱為洗脱液。

固定相一般是凝膠基質，常見的有瓊脂糖。為了防止目標分子與配體結合過程中的空間干擾或重疊，首先將含有烴鏈的抑制劑連接到瓊脂糖珠（固體支持物）上。這種具有烴鏈的抑制劑通常被稱為瓊脂糖珠和靶分子之間的間隔基。

免疫親和層析最常見的用途是純化重組蛋白。免疫親和層析是從粗混合物中純化蛋白質或核酸的第一步的絕佳選擇。如果蛋白質的分子量，疏水性，電荷等未知，親和色譜法仍可適用於這種情況。一個典型例子是嘗試分離具有特定活性的酶時，可以用與所選底物相似或相同的連接配體構建親和柱。

一種基於免疫層析測試（ICT）試紙的親和層析測試。有別於普通臨牀檢測，該試紙提供了快速的診斷手段。使用ICT，技術人員無需使用實驗室，即可在患者的牀邊進行測定。 ICT檢測對引起感染的微生物高度特異。

抗原和抗體利用抗原、抗體之間高特異的親和力而進行分離的方法又稱為免疫親和層析。例如將抗原結合於親和層析基質上，就可以從血清中分離其對應的抗體。在蛋白質工程菌發酵液中所需蛋白質的濃度通常較低，用離子交換、凝膠過濾等方法都難於進行分離，而親和層析則是一種非常有效的方法。將所需蛋白質作為抗原，經動物免疫後製備抗體，將抗體與適當基質偶聯形成親和吸附劑，就可以對發酵液中的所需蛋白質進行分離純化。抗原、抗體間親和力一般比較強，其解離常數為108－10?12M，所以洗脱時是比較困難的，通常需要較強烈的洗脱條件。可以採取適當的方法如改變抗原、抗體種類或使用類似物等來降低二者的親和力，以便於洗脱。

另外金黃色葡萄球菌蛋白A（ProteinA）能夠與免疫球蛋白G（IgG）結合，可以用於分離各種IgG。