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交聯葡聚糖凝膠
鎖定
- 中文名
- 交聯葡聚糖凝膠
- 外文名
- Sephadex
- 適用於
- 脱鹽、肽與其它小分子的分離
- 溶 於
- 水及親脂溶劑
- 使用方法
- 乙醇浸泡
交聯葡聚糖凝膠簡介
交聯葡聚糖凝膠商品屬性
Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶於水及親脂溶劑，用於分離不溶於水的物質。
交聯葡聚糖凝膠是 將純化後的線性葡聚糖（a-1，b-吡喃型葡聚糖）與環氧氯丙烷反應，再導入丙三醇側鏈而在葡聚糖鏈間形成交聯鏈，再將所得的凝膠製成直徑不同的球形即可。所得三維實體在水中能溶脹而不能溶解。交聯度越高，凝膠孔徑越小。
交聯葡聚糖凝膠用途
Sephadex G-15葡聚糖凝膠 G-15 分離範圍＜1500 適用於脱鹽、肽與其它小分子的分離；
Sephadex G-25葡聚糖凝膠 G-25 分離範圍 1000-5000 適用於脱鹽、肽與其它小分子的分離；
SephadexG-50葡聚糖凝膠 G-50 分離範圍 1500-30000 適用於多肽分離、脱鹽、清洗生物提取液、分子量測定；
Sephadex G-100葡聚糖凝膠 G-100 分離範圍 4000-150000 適用於蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定；
Sephadex G-150葡聚糖凝膠 G-150 分離範圍 5000-300000 適用於蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定；
Sephadex G-200葡聚糖凝膠 G-200 分離範圍 5000-600000 適用於蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定。
交聯葡聚糖凝膠製備過程
葡聚糖凝膠微珠表面形態存在粒子凝集和表面粗糙兩種不良情況。粒子凝集的原因是分散劑聚醋酸乙烯酯(PVAc)在鹼性條件下水解導致親水性增強，以及交聯反應的中間產物具有絮凝作用。另外，交聯後粒子粘度增大也可導致凝集。葡聚糖微珠表面粗糙是由於後處理時PVAc的微小附着物沒有從微珠表面完全除去而造成的。作者採取低温分散、交聯，分步加入交聯劑和調節攪拌速度等控制手段，有效地解決了上述問題。
交聯葡聚糖凝膠使用方法
1. 乙醇浸泡：
在室温下，將乾粉浸泡於50-60%乙醇中至少24小時，並不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾幹;
2.無鹽水浸泡：
室温下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的完全溶脹，然後；
3. 鹽酸浸泡：
在常温下再用0.2N HCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾幹，水洗至中性；
4. 將溶脹好的凝膠脱氣後（真空抽濾或超聲波）根據裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態裝柱，並避免柱內產生氣泡或斷層；
6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱牀體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的牀體積，視分離情況可以調整；脱鹽時上樣量可以達到20% 的柱牀體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱高控制在40-50cm 以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當儘可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制，脱鹽時高徑比為5：1 即可；
7. 洗脱方法：
8. 在位清洗（CIP）
交聯葡聚糖凝膠
