基因工程實驗

陳蔚青主編的《高等院校生物類專業系列教材：基因工程實驗》介紹了基因工程的基本操作技術與實驗手段。內容包括基因組DNA的提取，質粒DNA的提取，總RNA和mRNA的分離提取，核酸和蛋白質的凝膠電泳，DNA擴增和cDNA文庫的構建，限制性內切酶的酶切反應，重組質粒的連接、轉化及鑑定，大腸桿菌感受態細胞的製備，Southern印跡雜交，western印跡雜交，外源基因在大腸桿菌中的誘導表達，基因表達產物的檢測分析和分離純化等技術。書末附有基因工程操作中常用的溶液和緩衝液、基因工程實驗室常規儀器設備等資料。

本教材本着實用、可行的原則進行內容設計，涵蓋了基因工程的常用實驗方法和技術，並吸收了近年來發展起來的新技術和新方法，內容具有普及性與連貫性，且通過綜合性實驗的設計以培養學生的科研能力。本教材主要面向生物工程、生物技術專業應用型本科學生，既可作為實驗教材，也可作為基因工程實驗教學的參考書。

基礎性實驗篇

第1章 核酸的分離與純化技術

實驗1.1 基因組DNA的提取

實驗1.2 質粒DNA的提取與純化

實驗1.3 總RNA和mRNA的製備

第2章 電泳技術

實驗2.1 DNA瓊脂糖凝膠電泳

實驗2.2 RNA瓊脂糖凝膠電泳

實驗2.3 從低熔點膠瓊脂糖凝膠中分離回收DNA片段

實驗2.4 SDS一聚丙酰胺凝膠電泳

第3章 DNA擴增和CDNA文庫的構建

實驗3.1 聚合酶鏈反應擴增目的DNA

實驗3.2 CDNA文庫的構建

實驗3.3 定量PCR

第4章 重組質粒的連接與轉化

實驗4.1 限制性內切酶的酶切反應

實驗4.2 外源DNA和質粒載體的連接反應

實驗4.3 大腸桿菌感受態細胞的製備

實驗4.4 重組質粒的轉化與選擇

第5章 重組子的篩選與鑑定

實驗5.1 Southern印跡雜交

實驗5.2 Northern印跡雜交

實驗5.3 菌落原位雜交

實驗5.4 斑點雜交

實驗5.5 Western印跡雜交

綜合性實驗篇

第6章 工程菌的構建、培養與目的產物的分離純化

實驗6.1 工程菌的構建

實驗6.2 高表達工程菌株的篩選與保藏

實驗6.3 工程菌生長曲線分析

實驗6.4 重組產物表達影響因素實驗

實驗6.5 工程菌發酵工藝實驗

實驗6.6 表達產物的分離純化

附 錄

附錄1 基因工程操作中常用的溶液和緩衝液

附錄2 培養基與試劑的配製

附錄3 常用抗生素

附錄4 常用縮略語

附錄5 常用儀器設備

附錄6 梯度PCR儀的介紹及使用説明